菌，分别转接至LB培养基，加入IPTG诱导，收菌1ml Bugbuster kit破菌。离心分别取上清及沉淀，进行Western blot检测。12%SDS-PAGE电泳，转膜，封闭。加兔抗人BCI-2(N—19)单克隆抗体(1:300)，室温孵育2h，HRP标记的山羊抗兔IgG(1:2000)室温孵育lh，洗涤后加ECL发光试剂3min，于暗室中曝光显影。

    2 结果

    2.1 BCI-2cDNA的克隆结果

    RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后在紫外透光分析仪下观察。

    2.2 BCI-2 Loop domain结构域的55和70位氨基

    酸突变蛋白表达western blot检测结果

    诱导指IPTG诱导表达，上清、沉淀脂破菌以后离心得到的上清和沉淀，分别电泳，即观察可溶和包涵体的情况，说明诱导后BCI-2蛋白表达，阳性指BCI-2未突变经IPTG诱导；55位和70位氨基酸突变后BCI-2蛋白在上清中和沉淀中均可检测到。见。

    2.3 BCI-2 Loop domain结构域缺失突变蛋白表达

    western blot检测结果

    IPTG诱导后野生型BCI-2蛋白在上清和沉淀中均有表达 ......