脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞中microRNA-146a与TNF-α的相关性研究(3)
1.3 统计学方法
采用SPSS 13.0统计软件进行分析，实验数据以均数±标准差(x±s)表示，多样本均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，相关性采用双变量Pearson相关性分析。以P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 TNF-α蛋白在培养上清液中的动态表达变化
LPS刺激0、3、6、12 h后，培养上清液中的TNF-α蛋白含量分别是(29.53±7.80) pg/ml、(359.80±57.54) pg/ml、(586.22±30.57) pg/ml、(729.22±50.40) pg/ml。表明TNF-α蛋白是随着LPS刺激时间的延长表达逐步的升高。见图1。
2.2 TNF-α mRNA在脂多糖诱导AM中的动态表达变化
, 百拇医药
LPS刺激AM 3、6、12 h后的TNF-α mRNA分别是0 h的(67.48±24.52)倍(P<0.01)、(29.53±4.26)倍(P<0.01)、(11.37±2.52)倍(P<0.01)。表明LPS刺激3 h后，肺泡巨噬细胞中的TNF-α mRNA的表达显著增加并达到最大值，6 h后开始逐步降低。见图2。
2.3 miR-146a在脂多糖诱导AM中的动态表达变化
LPS刺激3 h后，miR-146a的表达与0 h差异无统计学意义。6 h后，细胞中的miR-146a表达水平是0 h的(5.33±0.81)倍(P<0.01)，12 h组的miR-146a是0 h组的(8.21±1.19)倍(P<0.01)。表明miR146a的升高出现在一个偏晚的时间点，并且是逐步的升高。见图3。
2.4 相关性分析
, 百拇医药 采用LPS刺激3、6、12 h的9个标本的miR-146a和TNF-α mRNA数据绘制散点图(图4)。Pearson相关性分析发现细胞中miR-146a的表达水平与TNF-α mRNA的含量呈负相关(r=-0.895，P<0.01)。
3 讨论
LPS作为革兰阴性细菌外壁层中的主要成分[9]，它能激活Toll样受体4(TLR4)-核转录因子KappaB(NF-κB)信号通路，诱导包括TNF-α在内的多种炎症因子的表达[10-11]。TNF-α又称恶液素(cachectin)，其不但可以直接介导损伤作用，还可以通过自分泌和旁分泌等作用激活免疫细胞和炎症信号通路，诱导其它的炎症因子的表达，发挥正反馈放大炎症的作用。TNF-α是内毒素性休克或ALI早期产生的最重要的细胞因子之一，对炎症或急性肺损伤的发展起着重要的作用。本研究发现LPS刺激AM 3 h后，肺泡巨噬细胞中的TNF-α mRNA的表达即达到顶峰。在蛋白水平，LPS刺激3、6、12 h后，TNF-α表达都明显增高，并且在0～12 h的时间段里是时间依赖性的增高。这跟Wong等[12]对AM的研究类似。
, http://www.100md.com
在产生炎症反应的同时，机体同样也会保护性的产生一些抗炎介质和负性调节炎症反应的基因[11，13]。最近研究发现miR-146a，miR-132， miR-155，等多种miRNA也参与了炎症反应的调控[14]。Taganov等[5]发现用LPS刺激THP-1细胞后，miR-146a的表达上调，并证实TLRs信号通路中NF-κB上游的两个重要接头蛋白编码基因——白介素-1受体相关激酶(interleukin-1 receptor-associated kinase，IRAK)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor-associated factor6，TRAF6)是miR-146a的靶基因。Pauley等[6]通过转染miR-146a模拟物入THP-1细胞可以下调由LPS导致的炎症性细胞因子的升高。因此在固有免疫中就存在着这样一个全新的负反馈调节通路：TLRs通路的激活导致miR-146a表达，上调的miR-146a可以通过抑制IRAKI和TRAF6来负反馈调节TLRs通路，从而达到对炎症反应的负性调节作用。笔者的研究显示miR-146a表达与TNF-α mRNA的含量呈负相关，因此我们推测在AM中，由LPS诱导的miR-146a可能负性调控炎症反应。
, http://www.100md.com
参考文献
[1]Phua J, Badia JR, Adhikari NK, et al. Has mortality from acute respiratory distress syndrome decreased over time? A systematic review [J]. Am J Respir Crit Care Med, 2009, 179(3):220-227.
[2] Chopra M, Reuben JS, Sharma AC. Acute lung injury:apoptosis and signaling mechanisms [J]. Exp Biol Med (Maywood), 2009, 234(4):361-371.
[3] Bartel DP. MicroRNAs: genomics, biogenesis, mechanism, and function [J]. Cell, 2004, 116(2):281-297.
[4] Ambros V. The functions of animal microRNAs [J]. Nature, 2004, 431(7006):350-355.
[5] Taganov KD, Boldin MP, Chang KJ, et al. NF-kappaB-dependent induction of microRNA miR-146, an inhibitor targeted to signaling proteins of innate immune responses [J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 2006, 103(33):12481-12486., 百拇医药(曾振国 龚洪翰 李勇 聂贞蕴 揭克敏 詹以安 聂成 刘芬 丁成志 邵强 卿城 朱)
采用SPSS 13.0统计软件进行分析，实验数据以均数±标准差(x±s)表示，多样本均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，相关性采用双变量Pearson相关性分析。以P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 TNF-α蛋白在培养上清液中的动态表达变化
LPS刺激0、3、6、12 h后，培养上清液中的TNF-α蛋白含量分别是(29.53±7.80) pg/ml、(359.80±57.54) pg/ml、(586.22±30.57) pg/ml、(729.22±50.40) pg/ml。表明TNF-α蛋白是随着LPS刺激时间的延长表达逐步的升高。见图1。
2.2 TNF-α mRNA在脂多糖诱导AM中的动态表达变化
, 百拇医药
LPS刺激AM 3、6、12 h后的TNF-α mRNA分别是0 h的(67.48±24.52)倍(P<0.01)、(29.53±4.26)倍(P<0.01)、(11.37±2.52)倍(P<0.01)。表明LPS刺激3 h后，肺泡巨噬细胞中的TNF-α mRNA的表达显著增加并达到最大值，6 h后开始逐步降低。见图2。
2.3 miR-146a在脂多糖诱导AM中的动态表达变化
LPS刺激3 h后，miR-146a的表达与0 h差异无统计学意义。6 h后，细胞中的miR-146a表达水平是0 h的(5.33±0.81)倍(P<0.01)，12 h组的miR-146a是0 h组的(8.21±1.19)倍(P<0.01)。表明miR146a的升高出现在一个偏晚的时间点，并且是逐步的升高。见图3。
2.4 相关性分析
, 百拇医药 采用LPS刺激3、6、12 h的9个标本的miR-146a和TNF-α mRNA数据绘制散点图(图4)。Pearson相关性分析发现细胞中miR-146a的表达水平与TNF-α mRNA的含量呈负相关(r=-0.895，P<0.01)。
3 讨论
LPS作为革兰阴性细菌外壁层中的主要成分[9]，它能激活Toll样受体4(TLR4)-核转录因子KappaB(NF-κB)信号通路，诱导包括TNF-α在内的多种炎症因子的表达[10-11]。TNF-α又称恶液素(cachectin)，其不但可以直接介导损伤作用，还可以通过自分泌和旁分泌等作用激活免疫细胞和炎症信号通路，诱导其它的炎症因子的表达，发挥正反馈放大炎症的作用。TNF-α是内毒素性休克或ALI早期产生的最重要的细胞因子之一，对炎症或急性肺损伤的发展起着重要的作用。本研究发现LPS刺激AM 3 h后，肺泡巨噬细胞中的TNF-α mRNA的表达即达到顶峰。在蛋白水平，LPS刺激3、6、12 h后，TNF-α表达都明显增高，并且在0～12 h的时间段里是时间依赖性的增高。这跟Wong等[12]对AM的研究类似。
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在产生炎症反应的同时，机体同样也会保护性的产生一些抗炎介质和负性调节炎症反应的基因[11，13]。最近研究发现miR-146a，miR-132， miR-155，等多种miRNA也参与了炎症反应的调控[14]。Taganov等[5]发现用LPS刺激THP-1细胞后，miR-146a的表达上调，并证实TLRs信号通路中NF-κB上游的两个重要接头蛋白编码基因——白介素-1受体相关激酶(interleukin-1 receptor-associated kinase，IRAK)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor-associated factor6，TRAF6)是miR-146a的靶基因。Pauley等[6]通过转染miR-146a模拟物入THP-1细胞可以下调由LPS导致的炎症性细胞因子的升高。因此在固有免疫中就存在着这样一个全新的负反馈调节通路：TLRs通路的激活导致miR-146a表达，上调的miR-146a可以通过抑制IRAKI和TRAF6来负反馈调节TLRs通路，从而达到对炎症反应的负性调节作用。笔者的研究显示miR-146a表达与TNF-α mRNA的含量呈负相关，因此我们推测在AM中，由LPS诱导的miR-146a可能负性调控炎症反应。
, http://www.100md.com
参考文献
[1]Phua J, Badia JR, Adhikari NK, et al. Has mortality from acute respiratory distress syndrome decreased over time? A systematic review [J]. Am J Respir Crit Care Med, 2009, 179(3):220-227.
[2] Chopra M, Reuben JS, Sharma AC. Acute lung injury:apoptosis and signaling mechanisms [J]. Exp Biol Med (Maywood), 2009, 234(4):361-371.
[3] Bartel DP. MicroRNAs: genomics, biogenesis, mechanism, and function [J]. Cell, 2004, 116(2):281-297.
[4] Ambros V. The functions of animal microRNAs [J]. Nature, 2004, 431(7006):350-355.
[5] Taganov KD, Boldin MP, Chang KJ, et al. NF-kappaB-dependent induction of microRNA miR-146, an inhibitor targeted to signaling proteins of innate immune responses [J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 2006, 103(33):12481-12486., 百拇医药(曾振国 龚洪翰 李勇 聂贞蕴 揭克敏 詹以安 聂成 刘芬 丁成志 邵强 卿城 朱)