黎 星，霍 聪，刘 艳，许 荣，夏跃胜，贾 新，王晓明

    (第四军医大学西京医院老年病科，西安 710032)

    大量研究表明心肌细胞凋亡是心肌缺血再灌注损伤、扩张型心肌病、糖尿病心肌病、心力衰竭等诸多心脏疾病发生发展的重要病理生理过程[1-5]，因此减少心肌细胞凋亡仍是临床治疗、减缓和逆转心脏疾病首要考虑的方法，所以寻找方便、经济、简单的心肌保护药物显得尤为重要。

    姜黄素类化合物是姜黄、莪术等传统中药植物中提取的天然成份，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等重要作用。主要成份有姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素(bisdemethoxycurcumin, BDMC)。研究发现姜黄素在心肌缺血再灌注损伤和心力衰竭中能减轻心肌细胞凋亡，发挥心肌保护作用[6,7]。但是姜黄素天然衍生物BDMC的心肌保护作用尚未被报道。因此本研究通过经典的线粒体途径凋亡诱导剂星型孢菌素(staurosporine, STS)建立细胞凋亡模型， 探讨BDMC对心肌细胞凋亡的影响及在凋亡过程中与细胞存活率和细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的关系，为BDMC能够进入临床使用提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    0～2 d的C57BL/6J小鼠乳鼠(第四军医大学动物实验中心)。5-溴-2-核苷尿嘧啶(BrdU；MP公司，美国)。BDMC(慕颐生物科技有限公司，上海)，二甲基亚砜(DMSO)、STS(Sigma-Aldrich公司，美国)，CCK-8细胞活性检测试剂盒、ROS活性检测试剂盒(恩晶生物科技有限公司，南京)。原位末端标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling, TUNEL)凋亡检测试剂盒(GeneCopoeia公司，美国)。Caspase-3酶活性检测试剂盒(Thermo公司，美国)。

    1.2 方法

    1.2.1 原代心肌细胞培养 75%乙醇消毒小鼠乳鼠身体，取出心脏，冰PBS清洗3次。Ⅱ型胶原酶(1 g/L)消化6～7次，每次5 min。收集消化后的细胞悬液，加入新鲜培养液终止消化，以800转/min离心6 min后弃上清，加入培养液重悬细胞，200目滤网过滤后接种于培养瓶中，37℃、5%CO2差速贴壁1 h除去成纤维细胞。将含10%胎牛血清的DMEM与10 mmol/L的BrdU以1∶100的比例混合加入细胞，37℃、5%CO2、饱和湿度培养24 h后更换培养液，然后继续培养至细胞同步搏动待用 ......