宋洁，洪海

    (1第三军医大学西南医院预防保健科，重庆 400038；2北京郑常庄离职干部休养所卫生所，北京 100141)

    细菌生物膜是指细菌在细胞外多聚物包裹中形成的具有立体结构的细胞群落，生物膜内的细菌可在信号分子的调控下分工协作，使生物膜内的细菌具有与高等细胞相似的功能[1,2]。细菌形成生物膜后可使其抗药性成百上千倍增高，且在多糖等保护下可逃避免疫系统的攻击，导致感染治疗的失败，这已成为抗感染领域的难题，临床上85%的感染都和细菌生物膜相关[3]。

    pH是肺部内环境的一个重要影响因素，人体气道表面液体和肺泡液体pH值为6.6～6.9[4]。在疾病过程中，由于肺组织感染及呼吸性酸碱中毒等疾病的影响，患者呼吸道内的pH值可随病情有所改变，从而影响细菌的清除和抗菌药物的活性[4,5]。研究发现，肺部感染时由于细菌代谢等因素，感染局部组织呈酸性。肺炎克雷伯菌是呼吸道感染的常见病原菌，我们对pH值酸性条件下肺炎克雷伯菌的抗药性及生物膜形成能力的变化进行研究，以期为临床医师提供用药指导。

    1 对象与方法

    1.1 研究对象

    12株肺炎克雷伯菌(K1-K12)均分离自第三军医大学西南医院预防保健科呼吸科住院患者的痰液标本。

    1.2 试剂与设备

    抗菌药物左氧氟沙星、庆大霉素和头孢他啶购自中国食品药品检定研究院。结晶紫购自Sigma公司，冰醋酸购自重庆川东化工有限公司。血琼脂平板购自重庆庞通医疗器械有限公司，MH和LB培养基购自北京陆桥生物技术有限公司，96孔板购自美国康宁公司，酶标仪购自美国MD公司。

    1.3 方法

    1.3.1 不同pH值条件下最低抑菌浓度的测定 采用微量肉汤稀释法测定不同pH值环境下抗菌药物对细菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration，MIC)。肺炎克雷伯菌划线接种于血琼脂平板上，37℃培养过夜。挑取细菌单菌落接种于10 ml MH培养基中，37℃、200转/ min培养18 h。用无菌生理盐水稀释校正菌液至0.5麦氏单位(约108 CFU/ml)，然后分别用不同pH值(5.5、6.5和7.5)的MH培养基稀释1000倍。抗菌药物分别用pH值为5.5、6.5和7.5的MH培养基进行倍比稀释。然后在96孔板中每孔加入100 μl菌液和100 μl不同浓度的抗菌药物溶液，使药物终浓度分别为256和0.125 μg/ml。37℃孵育18 h后判断结果，以能完全抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC ......