盐藻cbr基因启动子及其3′-非翻译区序列的克隆
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关键词 盐藻；胡萝卜素生物合成相关基因；启动子；3：非翻译区
中图分类号 Q781
摘要 目的：克隆盐藻cbr基因启动子和3：非翻译区(3-′UTR)片段。方法：设计2对引物，通过1轮巢式PCR反应，扩增cbr基因启动子，其中首轮PCR反应使用改良的降落PCR程序，第二轮巢式PCR反应的模板是第一轮 PCR产物，使用普通.PCR程序；cbr基因3′-UTR片段的克隆采用一对引物，通过一般PCR程序得到。结果：通过巢式PCR得到长约1.1 Lb的cbr基因启动子片段，DNA测序结果表明碱基序列与文献记载完全相同，尤任何碱基突变；克隆的K 0.3 kb，的cbr基因3-′UTR片段经人工比较，与收录的序列吻合，无碱基突变。结论：利用普通Taq酶对用PCR方法克隆得到了盐藻胡萝卜素生物合成相关基因cbr的2个基冈表达调控序列；结合使用巢式PCR和改良降落PCR，可以非常有效地克隆具有复杂二级结构的DNA片段；通过两端人工添加的限制序列，将cbr基因启动子和3-′UTR 2个调控片段构建到同一个载体上，形成cbr基因表达盒，为构建转基因盐藻表达载体打下了基础。
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