无症状沙眼衣原体和溶脲脲原体感染与输卵管不孕症的相关性研究
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参见附件(147KB，2页)。
[摘要]目的 探讨无症状沙眼衣原体(Ct)、溶脲脲原体(Uu)感染与输卵管不孕症的关系。 方法 42例输卵管不孕症患者作为观察组，34例有正常生育史育龄妇女作为对照组。取宫颈分泌物和外周血血清分别采用PCR和ELISA法检测两组标本中Ct和Uu的感染情况。 结果 输卵管不孕症组宫颈分泌物中，Ct阳性率为26.2%(11.42)，Uu阳性率为64.3%(27.42)，Ct和Uu混合阳性率为14.3%(6.42);对照组中Ct阳性率为5.9%(2.34)，Uu阳性率为11.8%(4.34)，Ct和Uu混合阳性率为0;两组间比较，差异均有极显著性(P<0.01)。输卵管不孕症组外周血血清中Ct阳性率为2.4%(1.42)，Uu阳性率为4.8%(2.42)，Ct和Uu混合阳性率为0;对照组中Ct阳性率为2.9%(1.34)，Uu阳性率为5.9%(2.34)，Ct和Uu混合阳性率为0，分别与对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。 结论 无症状Ct和Uu感染与女性输卵管不孕症有着密切的联系。
[关键词] 输卵管不孕症;沙眼衣原体;溶脲脲原体
Relationships between asymptomatic infection of chlamydia trachomatis
and ureplasm urealyticum and tubal infertility
ZHU Jian-wen，ZOU Li，CHEN Li-juan
(Department of Obstetrics and Gynecology，Union Hospital，Tong Ji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430022，China)
Abstract:Objective To study the relationships between asymptomatic infection of chlamydia trachomatis(Ct)and ureplasm urealyticum(Uu)and tubal infertility.Methods Forty two samples of cervical secretions of the patients with tubal infertilitywere collocted for observation，while another34samples of cervical secretions of the normal child-bearing period women as controls.Polymerase chain reaction(PCR)was used to detect the infections of Ct and Uu in the two groups.Results The positive rate of the Ct，Uu，Ct and Uu comblined infections in the samples of cervical secretions of the patients with tubal infertility are26.2%，64.3%and14.3%respectively，while the positive rate of the Ct，Uu，Ct and Uu combined infections in the samples of the control groups were5.9%，11.8%and0respectively，showing a significant difference between the two groups(P<0.01).The posi-tive rate of the Ct，Uu，Ct and Uu combined infections in the samples of serum of peripheral blood of the patients with tubal infertility were2.4%，4.8%and0respectively，that of the control group2.9%，5.9%and0respec-tively，which show no difference between the two groups(P>0.05).Conclusion The occurrence of tubal infer-tility closely related with asymptomatic infections of chlamydia trachomatis and ureplasm urealyticum.
Key words:tubal infertility;chlamydia trachomatis;ureplasm urealyticum
沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，Ct)和溶脲脲原体(Ureplasm urealyticum，Uu)是常见的性传播疾病的病原体，其侵入女性生殖系统引起的泌尿生殖系感染已引起了国内外学者的广泛关注，且相当部分患者呈无症状性携带状态[1] 。为了解无症状Ct和Uu的感染与女性输卵管不孕症的关系，作者分别采用PCR和ELISA法对42例女性输卵管不孕症患者的宫颈分泌物和外周血血清进行Ct和Uu的检测，同时以正常已婚妇女作对照，现将结果报告如下。
1 对象与方法
1.1 对象
选择2003年8月～2004年1月间来我院就诊的门诊及住院患者共84例。其中输卵管不孕症组42例，既往有或无妊娠史，性生活正常，无可记载的生殖道急慢性炎症病史，1年以上未采取避孕措施而未孕，检查示卵巢功能正常，其配偶精液正常，输卵管碘油造影提示一侧或双侧输卵管阻塞(或积水)，年龄24～36岁，平均(28.4±3.4)岁;对照组42例，有正常生育史，无生殖系统不适及异位妊娠史，年龄22～37岁，平均(27.7±2.9)岁。
1.2 标本采集
宫颈分泌物的采集:两组用特制无菌棉拭采集宫颈分泌物，置于含1.5ml无菌生理盐水的塑料离心管中，充分洗下棉拭上的分泌物，贴管壁将棉拭挤干弃去。然后每份标本均分两管，以15000r·min-1 离心10min，弃上清，在沉淀中加50μl DNA提取液充分混匀，煮沸10min，10000r·min-1 离心5min取上清，制备成模板DNA备用。外周血血清标本采集:两组均按无菌程序操作获取孕妇外周血，于2h之内使用。
1.3 方法
PCR法:采用中山医科大学达安基因股份有限公司提供的PCR试剂盒。扩增条件为94℃加热2min，然后按93℃45s，55℃45s，72℃42s共35个循环，最后72℃保温2min。自动PCR仪为德国Eppendorf公司产品，DYY.3型电泳仪为北京六一仪器厂产品，UV.200型紫外透射分析仪为华美公司产品。扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳后用透射分析仪检测，Ct在240bp处、Uu在459bp处出现阳性带，与阳性对照一致者即为阳性。ELISA法:采用晶美生物工程有限公司提供的固相酶联免疫吸附试验试剂盒，定性检测人血清中的特异性IgM抗体。酶联物按1∶101稀释，血清标本用标本稀释液按1∶51稀释，于37℃20min静置。各 加100μl阳性、弱阳性、阴性对照及已稀释待测标本上清液于相应孔中，空白对照孔加100μl标本稀释液，37℃30min，甩尽板中液体，200μl洗涤液洗5次，加酶联物100μl，37℃30min，甩尽板中液体，200μl洗涤液洗5次，加底物50μl，混匀，37℃15min。加终止液1滴，用酶标仪450nm测反应液OD值，判断结果。待测标本孔显色比弱阳性对照孔深则判断为阳性，反之为阴性。
1.4 统计学处理
所得数据用χ2 检验进行统计学分析。
2 结 果
2.1 输卵管不孕症组与对照组宫颈分泌物检测结果
42例输卵管不孕症组中Ct阳性者11例，阳性率为26.2%;Uu阳性者27例，阳性率为64.3%;Ct与Uu混合感染者6例，阳性率为14.3%。34例对照组中Ct阳性者2例，阳性率为5.9%;Uu阳性4例，阳性率为11.8%;未见Ct与Uu合并感染者。两组比较，差异有极显著性(P<0.01)。
2.2 输卵管不孕症组与对照组外周血血清分析结果
42例输卵管不孕症组中Ct阳性者1例，阳性率为2.4%;Uu阳性者2例，阳性率为4.8%;无Ct与Uu混合感染的病例。34例对照组中Ct阳性者1例，阳性率为2.9%;Uu阳性2例，阳性率为5.9%;未见Ct、Uu合并感染者。两组比较，差异无显著性(P>0.05)。各组宫颈分泌物与外周血血清中Ct及Uu阳性率比较差异有显著性(P<0.05)。
3 讨 论
3.1 Ct、Uu感染与输卵管功能障碍
Ct和Uu是介于细菌和病毒之间的病原微生物，是引起女性生殖器官感染的常见病原体，亦是非淋菌性尿道炎(NGU)的主要病原体。Ct是一种具有与革兰阳性细菌相似细胞壁的特殊病原体，可寄生于宿主细胞内，先在生殖腔道黏膜表层细胞内生长繁殖。其致病机制可能是Ct可分泌特殊的溶酶体并与吞噬体融合，导致溶酶体酶的释放及产生内毒素等代谢产物，引起自身免疫和变态反应从而造成机体损伤[2] 。Uu是寄生于呼吸道和泌尿生殖道黏膜表层的病原微生物，含有DNA。实验证实Uu能分解尿素产生NH4 ，而NH4 的毒性作用可以使输卵管黏膜的纤毛细胞脱落而使其失去原有功能。另外Uu产生的高分子质量物质能刺激宿主免疫活性细胞产生释放多种细胞因子而造成输卵管的局部免疫损伤[3] 。这些都可以改变输卵管自身的功能而导致受精卵的正常着床失败。
3.2 Ct、Uu的无症状携带状态与女性输卵管不孕
活动性Ct和Uu感染因可引起盆腔、输卵管的急、慢性炎症而导致不孕，但多数患者在感染Ct和Uu后并无明显的生殖系统急慢性炎症的表现，临床上多呈现出非特异性的表现，相当部分患者为无症状的携带状态。近年来的研究发现，Ct和Uu的潜伏性感染与女性输卵管妊娠[4] 以及男、女性不孕不育的发生亦有密切的联系。因潜伏性感染没有明显的临床症状，亦未接受有效的药物治疗，因此长期的持续感染容易导致感染蔓延。反复的Ct和Uu感染可导致输卵管粘连、僵硬及堵塞等慢性损伤[5] 。因此推测由于Ct和Uu感染引起的输卵管病变在女性输卵管不孕症中起着重要作用。本研究结果表明，输卵管不孕症患者宫颈分泌物中Ct、Uu的阳性率分别达到了26.2%和64.3%，显著高于对照组，且这些患者既往均无可记载的生殖道急慢性炎症病史。本研究还发现，输卵管不孕症组外周血血清中Ct、Uu阳性率显著低于宫颈分泌物，而两组外周血血清中Ct、Uu阳性率并无显著性差异，说明无症状Ct和Uu感染是一种局部的Ct、Uu携带状态，而并非全身感染，其主要影响到女性内生殖系统，从而进一步证实了Ct和Uu的潜伏性感染及无症状携带状态与女性输卵管不孕症关系密切。因此，对于女性Ct和Uu的感染，特别是亚临床感染须引起高度的重视，并给予积极和正规的治疗，一方面可以防止其发展成为急慢性的生殖道炎症，另一方面亦可预防输卵管不孕症的发生。
[参考文献]
[1]丁爱军.围生期解脲支原体感染[J].国外医学儿科学分册，1998，25:23.
[2]BLCANCO T D，WEN T S，BISHOP K.Prolonged prior infection with
clamydia prevents adverse pregnancy outcome in a murine model[J].Am J Obstet Gynecol，1997，176:745.750.
[3]王敬云，刘杰.支原体感染与妊娠[J].中国实用妇科与产科杂志，2001，17:713.715.
[4]朱剑文，李敏，邹丽.无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染与输卵管妊娠的关系[J].中国误诊学杂志，2002，2:1125.1126.
[5]李成志.女性生殖道沙眼衣原体感染[J].实用妇产科杂志，2002，18:85.87.
(华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科，湖北武汉 430022)
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