HBV DNA经小鼠精细胞垂直传递的研究(2)
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2.1 转染前后精子活力评估
倒置显微镜观察转染前后活动精子个数的变化，计数板计数，随机选取精子个数800个以评估精子活力，转染前活动精子677个，占84.6%，转染后活动精子688个，占86%，转染前后精子活力差异无统计学意义(P>0.05)。
2.2 精子中HBV DNA的存在
以与梭华SofaslTM基因转染试剂/HBV DNA复合物共培养后的精子DNA提取物为模板进行PCR扩增，结果见图1，2～5泳道精子样本的扩增产物在301bp处有明显条带，与阳性对照条带(泳道6)一致。
2.3 HBV DNA在精子中的定位
荧光原位杂交后荧光显微镜下观察，精子样本中部分精子带有阳性黄绿色杂交信号，阳性杂交信号位于精子头部的中后部区域两侧和顶部；荧光原位杂交后再经DAB显色，普通光镜下观察，阳性杂交信号为黄褐色颗粒，基本位于相同位置。对照组经DAB显色后，普通光镜下观察，无信号存在或只呈现本底水平染色，死精子经DAB显色后与对照一致。
2.4 精子细胞原位杂交结果的统计学分析
在高倍镜下观察转染和未转染HBV DNA的精子细胞涂片，随机选取视野计数500个精子，统计携带PBR322一HBV DNA的精子数目，转染组荧光原位杂交信号的阳性率为49.2%(246/500)，阴性对照组阳性率为2%(10/500)，二者差异有统计学意义(x2=292.40，P2=209.00，P, 百拇医药(高慧婕 刘 超 李 倩 王培林)