卡托普利对白蛋白引起HK-2细胞ACE/ACE2表达的影响(3)
2.5 CAP对BSA引起Ang Ⅱ浓度的影响
RIA结果显示，与对照组比较，BSA可显著增加细胞上清液中Ang Ⅱ 的浓度[(97.25±10.4) vs (28.53±3.5) pg•ml-1，P0.05](图5)。
与对照组比较, #P0.05
图5 卡托普利对白蛋白引起HK-2
细胞上清液AngⅡ浓度的影响
3 讨论
ACEI是最早应用于临床的RAS阻断剂，AIPRI (The angiotensin-converting-enzyme inhibition in progressive renal insufficiency study) [4]和REIN(Ramipril efficacy in nephropathy) [5]研究均证实，ACEI不仅可以降低血压，而且可以减少蛋白尿，从而延缓慢性肾脏病的进展。肾功能正常或轻度损害的IgA肾病患者应用福辛普利一年可使蛋白尿减少36%，而7年肾存活率达92%[6]，在非糖尿病性微量白蛋白尿患者，福辛普利也被证实可非降压依赖性地降低微量蛋白尿[7]。最近不少研究提示，蛋白尿本身就是一种肾脏毒素，会导致肾组织局部RAS激活，参与肾小管间质纤维化的形成 [8]。ACEI的肾保护作用是否与其通过抑制蛋白尿，进而抑制肾脏局部RAS激活是一个值得探讨的问题。
, http://www.100md.com
近年来越来越多的研究表明，肾脏存在独立于系统RAS的局部RAS，而局部RAS的激活在CKD的进展中发挥主要作用 [9]。Ang Ⅱ是局部RAS最主要的效应因子，通过促进细胞产生生长因子、趋化因子及炎症因子等参与纤维化的进程 [10]。而蛋白尿的肾毒性作用有部分是通过激活RAS而产生的。蛋白负荷可促进单侧肾切除术的大鼠近端肾小管表达肾素、ACE以及血管紧张素原增加 [2]。在转染血管紧张素原基因的小鼠，出现血压升高、白蛋白尿，同时应用培哚普利(perindopril)的小鼠上述症状明显减轻 [11]。
早在20世纪80年代,人们就认识到ACEI不仅能阻断循环RAS、扩张全身血管而降低血压，而且可通过扩张肾小动脉使肾小球毛细血管静水压降低，而血浆流量并未减少，从而减少尿蛋白，延缓CKD的进展[12]。有研究表明，ACEI可抑制肾损伤后引起的TGF-β mRNA表达增加,并降低其转录，这提示ACEI可能通过抑制TGF-β的表达而抑制肾脏纤维化 [13]。
, 百拇医药 最近研究发现，肾脏局部RAS主要有两条效应相反的代谢途径 [14]。血管紧张素原在肾素作用下酶解为Ang Ⅰ，后者再被ACE降解为Ang Ⅱ。Ang Ⅱ主要通过靶细胞膜上的血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1受体)发挥多种生物学效应，包括收缩血管、促进组织增生、炎症反应、纤维化等。另外，Ang Ⅰ还可被ACE2降解为Ang-(1-9)，后者再被ACE降解为Ang-(1-7)；而ACE2也可直接降解Ang Ⅱ, 形成Ang-(1-7)作用于mas受体，发挥与ACE-Ang Ⅱ-AT1途径相反的作用，表现为舒张血管、抑制增生、抗炎和延缓纤维化[15]。因此，现在越来越多的人认为，ACE/ACE2的激活状态可能直接决定了肾脏局部Ang Ⅱ产生的水平。
本研究在培养的肾小管上皮细胞，首先观察ACEI对于BSA刺激后HK2细胞ACE、ACE2表达的变化。结果显示，BSA在增加ACE表达的同时抑制ACE2的表达，CAP在基因和蛋白水平均能抑制BSA引起的ACE的表达上调和ACE2表达的缺失，提示CAP不仅抑制循环ACE的酶活性，而且在肾脏局部可抑制白蛋白引起的ACE和ACE2表达的失衡。本研究结果还显示，在细胞上清液中，BSA可引起Ang Ⅱ浓度显著增加，此现象可被CAP明显抑制，提示CAP抑制BSA所诱导的Ang Ⅱ产生可能与其抑制ACE表达而增加ACE2表达有关。本研究结果也进一步证实了ACEI具有双途径控制肾脏局部Ang Ⅱ水平的作用，为理解ACEI的肾保护作用机制提供了进一步的实验依据。Ferrario等[16]报道，服用ACEI的大鼠血浆Ang-(1-7)水平明显增高。有人也发现在心肌梗死的大鼠，Ang-(1-7)可减少心衰的发生[17]，提示增加ACE2的表达和活性对抑制局部RAS有重要影响。
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总之，本实验发现CAP能上调ACE2 mRNA和蛋白表达，此现象是否与ACE受抑制反馈性引起ACE2的增加有关，尚待进一步研究。ACEI具有对肾小管上皮细胞ACE/ACE2双向表达的调节作用，并能通过抑制RAS激活而发挥对肾脏的保护作用。
[参考文献]
[1]Remuzzi G, Perico N, Macia M, et al. The role of reninangiotensin-aldosterone system in the progression of chronic kidney disease[J]. Kidney Int, 2005, 68 (Suppl 99): S57-S65.
[2]Largo R, Gomez-Garre D, Soto K, et al. Angiotensin-cnverting enzyme is upregulated in the proximal tubules of rats with intense proteinuria[J]. Hypertens, 1999, 33: 732-739.
, 百拇医药
[3]Livak K J, Schmittgen T D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCt method[J]. Methods, 2001, 25: 402-408.
[4]Maschio G, Alberti D, Janin G, et al. Effect of the angiotensin-converting-enzyme inhibitor benazepril on the progression of chronic renal insufficiency. The angiotensin-converting-enzyme inhibition in progressive renal insufficiency study group[J].N Engl J Med, 1996, 334： 939-945.
[5]GISEN. Randomized placebo-controlled trial effect of ramipril on decline in glomerular filtration rate and risk of terminal renal failure in proteinuric, non-diabetic nephropathy[J]. Lancet, 1997, 349: 1857-1863., 百拇医药(高 珺 刘必成 王艳丽 李 青 张晓良)
RIA结果显示，与对照组比较，BSA可显著增加细胞上清液中Ang Ⅱ 的浓度[(97.25±10.4) vs (28.53±3.5) pg•ml-1，P0.05](图5)。
与对照组比较, #P0.05
图5 卡托普利对白蛋白引起HK-2
细胞上清液AngⅡ浓度的影响
3 讨论
ACEI是最早应用于临床的RAS阻断剂，AIPRI (The angiotensin-converting-enzyme inhibition in progressive renal insufficiency study) [4]和REIN(Ramipril efficacy in nephropathy) [5]研究均证实，ACEI不仅可以降低血压，而且可以减少蛋白尿，从而延缓慢性肾脏病的进展。肾功能正常或轻度损害的IgA肾病患者应用福辛普利一年可使蛋白尿减少36%，而7年肾存活率达92%[6]，在非糖尿病性微量白蛋白尿患者，福辛普利也被证实可非降压依赖性地降低微量蛋白尿[7]。最近不少研究提示，蛋白尿本身就是一种肾脏毒素，会导致肾组织局部RAS激活，参与肾小管间质纤维化的形成 [8]。ACEI的肾保护作用是否与其通过抑制蛋白尿，进而抑制肾脏局部RAS激活是一个值得探讨的问题。
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近年来越来越多的研究表明，肾脏存在独立于系统RAS的局部RAS，而局部RAS的激活在CKD的进展中发挥主要作用 [9]。Ang Ⅱ是局部RAS最主要的效应因子，通过促进细胞产生生长因子、趋化因子及炎症因子等参与纤维化的进程 [10]。而蛋白尿的肾毒性作用有部分是通过激活RAS而产生的。蛋白负荷可促进单侧肾切除术的大鼠近端肾小管表达肾素、ACE以及血管紧张素原增加 [2]。在转染血管紧张素原基因的小鼠，出现血压升高、白蛋白尿，同时应用培哚普利(perindopril)的小鼠上述症状明显减轻 [11]。
早在20世纪80年代,人们就认识到ACEI不仅能阻断循环RAS、扩张全身血管而降低血压，而且可通过扩张肾小动脉使肾小球毛细血管静水压降低，而血浆流量并未减少，从而减少尿蛋白，延缓CKD的进展[12]。有研究表明，ACEI可抑制肾损伤后引起的TGF-β mRNA表达增加,并降低其转录，这提示ACEI可能通过抑制TGF-β的表达而抑制肾脏纤维化 [13]。
, 百拇医药 最近研究发现，肾脏局部RAS主要有两条效应相反的代谢途径 [14]。血管紧张素原在肾素作用下酶解为Ang Ⅰ，后者再被ACE降解为Ang Ⅱ。Ang Ⅱ主要通过靶细胞膜上的血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1受体)发挥多种生物学效应，包括收缩血管、促进组织增生、炎症反应、纤维化等。另外，Ang Ⅰ还可被ACE2降解为Ang-(1-9)，后者再被ACE降解为Ang-(1-7)；而ACE2也可直接降解Ang Ⅱ, 形成Ang-(1-7)作用于mas受体，发挥与ACE-Ang Ⅱ-AT1途径相反的作用，表现为舒张血管、抑制增生、抗炎和延缓纤维化[15]。因此，现在越来越多的人认为，ACE/ACE2的激活状态可能直接决定了肾脏局部Ang Ⅱ产生的水平。
本研究在培养的肾小管上皮细胞，首先观察ACEI对于BSA刺激后HK2细胞ACE、ACE2表达的变化。结果显示，BSA在增加ACE表达的同时抑制ACE2的表达，CAP在基因和蛋白水平均能抑制BSA引起的ACE的表达上调和ACE2表达的缺失，提示CAP不仅抑制循环ACE的酶活性，而且在肾脏局部可抑制白蛋白引起的ACE和ACE2表达的失衡。本研究结果还显示，在细胞上清液中，BSA可引起Ang Ⅱ浓度显著增加，此现象可被CAP明显抑制，提示CAP抑制BSA所诱导的Ang Ⅱ产生可能与其抑制ACE表达而增加ACE2表达有关。本研究结果也进一步证实了ACEI具有双途径控制肾脏局部Ang Ⅱ水平的作用，为理解ACEI的肾保护作用机制提供了进一步的实验依据。Ferrario等[16]报道，服用ACEI的大鼠血浆Ang-(1-7)水平明显增高。有人也发现在心肌梗死的大鼠，Ang-(1-7)可减少心衰的发生[17]，提示增加ACE2的表达和活性对抑制局部RAS有重要影响。
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总之，本实验发现CAP能上调ACE2 mRNA和蛋白表达，此现象是否与ACE受抑制反馈性引起ACE2的增加有关，尚待进一步研究。ACEI具有对肾小管上皮细胞ACE/ACE2双向表达的调节作用，并能通过抑制RAS激活而发挥对肾脏的保护作用。
[参考文献]
[1]Remuzzi G, Perico N, Macia M, et al. The role of reninangiotensin-aldosterone system in the progression of chronic kidney disease[J]. Kidney Int, 2005, 68 (Suppl 99): S57-S65.
[2]Largo R, Gomez-Garre D, Soto K, et al. Angiotensin-cnverting enzyme is upregulated in the proximal tubules of rats with intense proteinuria[J]. Hypertens, 1999, 33: 732-739.
, 百拇医药
[3]Livak K J, Schmittgen T D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCt method[J]. Methods, 2001, 25: 402-408.
[4]Maschio G, Alberti D, Janin G, et al. Effect of the angiotensin-converting-enzyme inhibitor benazepril on the progression of chronic renal insufficiency. The angiotensin-converting-enzyme inhibition in progressive renal insufficiency study group[J].N Engl J Med, 1996, 334： 939-945.
[5]GISEN. Randomized placebo-controlled trial effect of ramipril on decline in glomerular filtration rate and risk of terminal renal failure in proteinuric, non-diabetic nephropathy[J]. Lancet, 1997, 349: 1857-1863., 百拇医药(高 珺 刘必成 王艳丽 李 青 张晓良)