外阴上皮内瘤变组织中P16和Ki-67的表达及其意义(2)
参见附件(12kb)。
1.2 试剂
Ki-67兔单克隆抗体、P16鼠单克隆抗体均购于福州迈新生物技术公司，SP试剂盒为Dako公司产品。
1.3 方法和结果判断
免疫组织化学按SP法进行染色，具体操作按说明书进行。用AEC显色，光镜下控制显色时间，流水终止反应；常规脱水，水溶性封片。
Ki-67以细胞核出现红色颗粒状物为阳性着色。由于正常的鳞状上皮基底层细胞Ki-67呈阳性表达，实验仅观察基底层以上的上皮细胞的阳性率，≥10%为阳性病例。同时按Ki-67阳性率10%～25%、26%～50%、>50% 3个级别进行统计分析。
P16以细胞质和(或)细胞核出现红色颗粒状物为阳性着色，P16免疫标记分为阴性、不连续的灶性阳性着色(且阳性细胞≤10%)和连续的弥漫的阳性着色(且阳性细胞>10%)。
1.4 统计学处理
观察P16和Ki-67的阳性率和阳性表达方式，比较P16和Ki-67标记结果在高级别VIN与正常组、高级别VIN与低级别VIN组之间的差异，采用SPSS 10.0统计软件包进行处理，行t检验，同时确定P16和Ki-67作为高级别VIN标志物的特异性、敏感性。
2 结 果
2.1 P16标记结果
见表1。
P16在高级别VIN组中的表达与正常组及低级别VIN组比较，P<0.01。正常组外阴上皮93.3%(28/30)的标本P16无着色，仅有6.7%(2/30)的标本上皮呈局灶性的P16阳性着色，且阳性细胞均分布于鳞状上皮下1/3，未见中1/3和上1/3弥漫着色的病例。
表1 VIN组织中P16的表达例
低级别VIN者56.3%(9/16)的标本P16呈现阳性，25.0%(4/16)的标本P16阳性染色阳性细胞位于上皮的下1/3，主要呈现灶性片状阳性着色；只有18.8%(3/16)的标本呈现较弥漫着色(图1)。高级别VIN标本P16均呈阳性着色，92.9%(26/28)的高级别VIN标本P16阳性着色超过上皮1/3,主要呈弥漫阳性着色(图2)。P16的阳性表达率在高级别VIN组与正常组、高级别VIN组与低级别组之间差异均具有显著统计学意义(P<0.01)。
Ki-67在高级别VIN组中的表达与正常组及低级别VIN组比较，P<0.01。正常组90.0%(27/30)的标本上皮Ki-67无着色，2例上皮Ki-67阳性着色且阳性细胞分布于鳞状上皮的下1/3，1例上皮Ki-67阳性细胞分布于鳞状上皮的下1/3以上。
低级别VIN组有37.5%(6/16)的标本Ki-67阳性细胞大于25%，且阳性细胞分布于上皮下1/3以上(图3)。所有高级别VIN者Ki-67均呈阳性，其中96.4%(27/28)的标本阳性细胞数大于25%，且分布到上皮中或上1/3(图4)。Ki-67的阳性表达率在高级别VIN组与正常组、高级别VIN组与低级别组之间差异均有显著统计学意义(P<0.01)。Ki-67的阳性表达率在低级别VIN组与正常组之间差异不具有统计学意义(P>0.01)。
图1 低级别VIN组织中P16呈现上皮下1/3不连续的片状胞质或胞核红色着色 SP法×100图2 高级别VIN(VIN Ⅲ)组织中P16呈上皮全层连续的胞质或胞核红色着色 SP法×100
图3 低级别VIN组织中Ki-67呈上皮下1/3细胞核红色着色 SP法×100
图4 高级别VIN组织中Ki-67呈上皮全层细胞核红色着色 SP法×100
2.2 Ki-67的标记结果
见表2。
2.3 P16与Ki-67作为高级别VIN标志物的意义
见表3。
表2 VIN组织中Ki-67的表达例
表3 免疫标志物P16、Ki-67在正常组织和不同级别VIN组织中的表达特点
注：P16阳性表达定义为中1/3和(或)上1/3上皮细胞的弥漫的阳性着色；Ki-67阳性表达定义为下1/3以上的上皮细胞大于或等于25%的细胞核阳性着色
通过对比高级别VIN组与低级别VIN组的P16、Ki-67标记结果发现，若将P16阳性表达界定为中1/3和(或)上1/3外阴上皮细胞弥漫阳性着色、Ki-67阳性界定为下1/3以上的上皮细胞大于或等于25%的细胞核阳性着色 ......
1.2 试剂
Ki-67兔单克隆抗体、P16鼠单克隆抗体均购于福州迈新生物技术公司，SP试剂盒为Dako公司产品。
1.3 方法和结果判断
免疫组织化学按SP法进行染色，具体操作按说明书进行。用AEC显色，光镜下控制显色时间，流水终止反应；常规脱水，水溶性封片。
Ki-67以细胞核出现红色颗粒状物为阳性着色。由于正常的鳞状上皮基底层细胞Ki-67呈阳性表达，实验仅观察基底层以上的上皮细胞的阳性率，≥10%为阳性病例。同时按Ki-67阳性率10%～25%、26%～50%、>50% 3个级别进行统计分析。
P16以细胞质和(或)细胞核出现红色颗粒状物为阳性着色，P16免疫标记分为阴性、不连续的灶性阳性着色(且阳性细胞≤10%)和连续的弥漫的阳性着色(且阳性细胞>10%)。
1.4 统计学处理
观察P16和Ki-67的阳性率和阳性表达方式，比较P16和Ki-67标记结果在高级别VIN与正常组、高级别VIN与低级别VIN组之间的差异，采用SPSS 10.0统计软件包进行处理，行t检验，同时确定P16和Ki-67作为高级别VIN标志物的特异性、敏感性。
2 结 果
2.1 P16标记结果
见表1。
P16在高级别VIN组中的表达与正常组及低级别VIN组比较，P<0.01。正常组外阴上皮93.3%(28/30)的标本P16无着色，仅有6.7%(2/30)的标本上皮呈局灶性的P16阳性着色，且阳性细胞均分布于鳞状上皮下1/3，未见中1/3和上1/3弥漫着色的病例。
表1 VIN组织中P16的表达例
低级别VIN者56.3%(9/16)的标本P16呈现阳性，25.0%(4/16)的标本P16阳性染色阳性细胞位于上皮的下1/3，主要呈现灶性片状阳性着色；只有18.8%(3/16)的标本呈现较弥漫着色(图1)。高级别VIN标本P16均呈阳性着色，92.9%(26/28)的高级别VIN标本P16阳性着色超过上皮1/3,主要呈弥漫阳性着色(图2)。P16的阳性表达率在高级别VIN组与正常组、高级别VIN组与低级别组之间差异均具有显著统计学意义(P<0.01)。
Ki-67在高级别VIN组中的表达与正常组及低级别VIN组比较，P<0.01。正常组90.0%(27/30)的标本上皮Ki-67无着色，2例上皮Ki-67阳性着色且阳性细胞分布于鳞状上皮的下1/3，1例上皮Ki-67阳性细胞分布于鳞状上皮的下1/3以上。
低级别VIN组有37.5%(6/16)的标本Ki-67阳性细胞大于25%，且阳性细胞分布于上皮下1/3以上(图3)。所有高级别VIN者Ki-67均呈阳性，其中96.4%(27/28)的标本阳性细胞数大于25%，且分布到上皮中或上1/3(图4)。Ki-67的阳性表达率在高级别VIN组与正常组、高级别VIN组与低级别组之间差异均有显著统计学意义(P<0.01)。Ki-67的阳性表达率在低级别VIN组与正常组之间差异不具有统计学意义(P>0.01)。
图1 低级别VIN组织中P16呈现上皮下1/3不连续的片状胞质或胞核红色着色 SP法×100图2 高级别VIN(VIN Ⅲ)组织中P16呈上皮全层连续的胞质或胞核红色着色 SP法×100
图3 低级别VIN组织中Ki-67呈上皮下1/3细胞核红色着色 SP法×100
图4 高级别VIN组织中Ki-67呈上皮全层细胞核红色着色 SP法×100
2.2 Ki-67的标记结果
见表2。
2.3 P16与Ki-67作为高级别VIN标志物的意义
见表3。
表2 VIN组织中Ki-67的表达例
表3 免疫标志物P16、Ki-67在正常组织和不同级别VIN组织中的表达特点
注：P16阳性表达定义为中1/3和(或)上1/3上皮细胞的弥漫的阳性着色；Ki-67阳性表达定义为下1/3以上的上皮细胞大于或等于25%的细胞核阳性着色
通过对比高级别VIN组与低级别VIN组的P16、Ki-67标记结果发现，若将P16阳性表达界定为中1/3和(或)上1/3外阴上皮细胞弥漫阳性着色、Ki-67阳性界定为下1/3以上的上皮细胞大于或等于25%的细胞核阳性着色 ......
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