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编号:11112049
含脂氧素A4受体同源基因真核表达载体的构建与转染系膜细胞
http://www.100md.com 2005年4月1日 吴升华 陆 超 董 玲 周国平 陈子庆
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     [摘 要] 目的:构建小鼠脂氧素A4受体同源基因(LRHG)的真核表达载体,克隆后转染小鼠肾小球系膜细胞,观察LRHG编码的脂氧素A4受体样蛋白(LRLP)在系膜细胞中的表达。方法:应用PCR方法,以小鼠睾丸cDNA为模板.扩增出LRHC基因片段,插入质粒pGEM—T中,转化人大肠杆菌JM109。扩增阳性重组质粒,经酶切后纯化并测序鉴定目的片段。构建含6×组氨酸(His)基因的真核表达载体pcDNA3.1/RHG-his,转化人大肠杆菌JN109扩增,酶切后再测序鉴定目的片段,抽提质料后转染系膜细胞,进行western blot鉴定LRLP的表达。结果:测序鉴定表明,克隆的LRHG序列与CenBank中LRHG原序列100%符合,应用抗6×His以抗体进行Western blot鉴定系膜细胞中有LR- LP的表达。结论:成功地构建了真核表达载体pcDNA3.1/LRHG-his,并转染了肾小球系膜细胞,获得了稳定的表达。

    [关键词] 脂氧素A4 受体同源基因;真核表达载体;克隆;转染;系膜细胞

    [中图分类号] Q782;R392.11

    [文献标识码] A

    [文章编号] 1671—7783(2005)02—0093—04

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