ＮＩＤＤ基因ＴａｑＭａｎ探针的制备及其在实时荧光定量ＰＣＲ方法中的应用
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[摘 要] 目的：制备NIDD基因TaqMan探针建立检测NIDD基因荧光定量PCR(FQ-PCR)，以进一步研究NIDD的表达情况。方法：采用RT-PCR法，从出生后一天的SD大鼠脑组织mRNA中扩增M肋基因的部分编码序列区(CDS)片段，克隆人PCEM-T载体，筛选阳性克隆、酶切鉴定及序列测定。采用TaqMan探针，以重组质粒为模板绘制标准曲线。结果：RT—PCR法扩增出一特异产物与预期长度112bp相符，DNA序列测序的结果与CeneBank提供的已知序列(AB098078)比较，所克隆的NIDD刀基因片段与其中的112bp完全相同，与NIDD基因100%同源。以重组质粒为模板绘制标准曲线，相关系数r大于0.99，反应效率显示为1，各点变异系数小于10%。结论：采用RT-PCR和T载体技术成功制备出可应用于FQ-PCR的M肋基因TaqMan探针。
[关键词] 实时荧光定量PCR；TaqMan探针；刚DD；大鼠；脑
[中图分类号] R446.61； R338.1
[文献标识码] A
[文章编号] 1671—7783(2006)03—0185—04
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