灯盏花对上颌前牵引中骨缝成骨的影响
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摘要：目的 观察灯盏花在上颌前牵引动物模型中对骨缝成骨的影响。方法16只兔随机分为实验组、对照组,每组各8只，两组动物均安置特制外置式牵引支架，向前持续弹性牵引。对照组于双侧前颌缝局部注射生理盐水，实验组则于局部注射灯盏花，每侧0.4mL，每24h注射1次。用序列四环素荧光标记法标记骨缝新形成的骨组织，荧光显微镜下观察，用计算机图像分析系统测量新骨量。结果 实验组新骨形成的量明显大于对照组(P<0.05)。结论 灯盏花在上颌前牵引动物模型中可加快骨缝新骨的形成。
关键词：灯盏花；上颌前牵引；骨形成
Effects of erigeron breviscapus on suture osteogenesis
during maxillary protractionWen Xing1,2, Zhou Hong1, Zou Min1, Ren Zhanping1
(1. College of Stomatology, Xian Jiaotong University, Xian 710004; 2. Xian Center
Hospital of China Railway First Group, Xian 710054, China)ABSTRACT: Objective To understand the effects of Erigeron Breviscapus (EB) on suture osteogenesis during maxillary protraction in animal models. Methods The experiment was carried in 16 pubertal rabbits using selfmade distraction devices during maxillary protraction，through which a forward elastic force (about 350 g ) was exerted. During maxillary protraction, the experimental group underwent Erigeron Breviscapus, injected about 0.4mL at either side of premaxilla maxillary suture every day, and the control group were injected physiological saline. Undecalcified tissue slices labeled by serial tetracycline fluorochrome for 28 days were prepared for examination of the newly formed bone by computer image analysis. The results were compared between the two groups. Results The quantity of newly formed bone was significantly different between the two groups. The experimental group showed more newly formed bones than the control group. Conclusion EB can promote suture osteogenesis during maxillary protraction in the model.
KEY WORDS: Erigeron Breviscapus; maxillary protraction; bone formation
正畸临床治疗中普遍认为上颌前牵引是矫治因上颌骨发育不足而产生的骨性Ⅲ类错牙合畸形的主要手段之一。但其治疗时间平均需要11个月之久，缩短治疗时间成为正畸医生关注的问题。现今多认为上颌骨骨缝的改建是上颌前牵引矫治的基础\[1\],我们通过对比灯盏花用药组与对照组在相同牵引时间内骨缝新骨形成量的不同，探讨灯盏花在兔上颌前牵引模型中对骨缝生长的影响。
1 材料与方法
1.1 动物与分组
选取兔龄为3个月、体质量(1.8±0.2)kg的雄性家兔16只(由西安交通大学动物实验中心提供)，随机分为对照组8只、实验组8只。实验前圈养1周，熟悉环境。
1.2 牵引器的制作与固位
制作适合于兔的外置式前牵引装置，其矫治器由外置式前牵引装置、白合金上切牙冠套及牵引橡皮圈组成。外置式前牵引装置用直径为3.5mm铁丝锻制并弯制而成，在兔颈部弯制固定于头颈枕部的项圈，项圈的四角上配置直径1.0cm小孔，通过皮绳固定于兔的两侧上肢，术者可自由取戴。在项圈上方的正中双股铁丝平行向前伸出一弧形牵引支架，用来做为前方牵引的固定支架(图1)。
在石膏模型上用白合金片制作上颌两切牙的套冠，用0.019×0.022的方丝弯制牵引钩，将牵引钩点焊在套冠唇侧中央，修整外形打磨抛光。将上颌两切牙清洁、吹干，用磷酸锌粘固剂将套冠粘接于其上，保证其固位良好。
1.3 实验设计
两组动物均安置特制外置式牵引支架和上切牙冠套，链状橡皮圈连接外置支架和切牙冠套上的牵引钩，向前持续弹性牵引，每日更换链状橡皮圈，测力器测量力约为350g。前牵引方向取腭平面与鼻骨中线，牙合平面-30°斜向下方向牵引，基本垂直与前颌缝走行的方向。对照组于双侧前颌缝局部注射生理盐水，实验组则于局部注射灯盏花(吉林辉南辉发制药股份有限公司)，每侧0.4mL，每24h注射1次。
1.4 序列四环素荧光标记
两组均于牵引后1、14、28d皮下注射30 g/L盐酸四环素，每只30mg/(kg·次)，进行序列四环素荧光标记。于牵引第30天处死动物。梯度乙醇脱水，将包含前颌缝的骨组织分切成小段骨，置入40g/L多聚甲醛溶液中固定1周，梯度乙醇脱水，甲基丙烯酸甲酯包埋(预聚法)，LEICA SM 2500E 硬组织切片机沿矢状方向切成10μm厚的切片。
1.5 图像分析和统计处理
在透射式荧光显微镜下，激发紫外光波长360～400nm，应用 Leica Q WIN55CW计算机图像分析仪进行图像分析。每一标本随机选取3个视野，测量荧光标记带外沿间的平均距离。用SPSS10 .0统计软件对两组测量值进行统计学检验，检验水准α=0.05。
2 结果
在荧光显微镜下，可见暗绿色背景上有亮黄色荧光标记带，标记带间呈平行排列，分别位于骨缝两侧的骨缘处。每组平行线由3条线组成，第1～3条线外沿之间的区域即第1～28天形成的新骨(图2、3)。对照组和实验组荧光标记带间距有所不同，带间距离反映了牵引过程中骨缝新骨生成的量。
取前颌缝较平直的中1/3处，在骨缝的前颌骨侧，各取3处采集图像，用计算机图像处理系统测量平行的第1～3条荧光标记带外沿间的平均距离。在28d的牵引期内，实验组新骨形成的量平均为(101.77±6.67)μm，对照组为(69.61±5.73)μm，两组比较有显著性差异(P<0.05)。表明在年龄、体重、性别、受力大小和方式等条件相同的情况下，灯盏花加速了上颌前牵引动物模型中骨缝的新骨形成。
3 讨论
上颌骨骨缝的改建是上颌前牵引矫治的生物学基础，对其新生骨质的定性和定量分析需要一些特殊的方法。四环素类药物是一种无毒、非放射性荧光染料，非脱钙切片或磨片上，经一定波长的紫外光激发出金黄色荧光，显示新骨形成部位及量。新骨的矿化分两个阶段，第一阶段也称原始矿化，是根据骨基质的纤维构形，由成骨细胞进行，这占了全部矿化的70%～80%。第二阶段也称继发矿化，通过结晶生长过程完成骨的矿化，此过程大约需要8个月。四环素可与骨矿化第一阶段的无定形磷酸钙结合，但不与矿化第二阶段的结晶性羟基磷灰石或未矿化的类骨质结合，因而可把矿化第一阶段特异地标记出来。四环素的沉积关键取决于吸收量，成骨活性及血流量。所以它是评估成骨活性、成骨量的一种方法。Jacob等\[2\]的实验都是通过皮下注射的方式给动物施加标记物，这样吸收的量可以控制的更准确，一般每次按每千克体重注射10～30mg四环素或土霉素。这样可定时、定量地控制摄入量，在此条件下，新生骨内四环素沉积荧光清晰，获得准确的骨计量学数据。本实验中我们观察到家兔髂动脉内膜损伤后内皮功能受损伴炎症反应，ET、CRP增高而NO降低，积雪草甙对家兔血管内膜损伤有良好修复作用，治疗组内膜得以修复，内皮细胞覆盖，ET、CRP降低，NO增高，并存在量效关系，而病理对照组无明显改善。鉴于再狭窄的形成为对血管损伤的过度修复反应，积雪草甙有加速创伤愈合，抑制成纤维细胞及基质形成，抗炎及促进血管内皮细胞生长的作用，因此，积雪草甙是防治PCI术后再狭窄很有希望的药物。从初步实验结果来看，积雪草甙具有治疗PCI术后再狭窄的作用，并可望在心脑血管病的防治中有很好的应用前景。
参考文献：
[1\]Braunwald, 陈灏珠. 心脏病学 \[M\]. 北京：人民卫生出版社，2002.
[2\]秦路平，庄卫国，郑汉臣，等. 积雪草研究进展 \[J\]. 国外医学·植物药分册, 1997, 12(4):154-157.
[3\]Brinkhaus B, Linder M, Schuppan D, et al. Chemical, pharmacological and clinical profile of the East Asian medical plant Centella asiatica \[J\]. Phytomedicine, 2000,7(5):427-448.
[4\]宋清华，狄春晖，崔鸣，等. 积雪甙对伤口愈合作用的基础研究 \[J\]. 中国医药导刊, 2000, 2(5):37-40.
基金项目：陕西省科学技术研究发展计划(攻关)项目\[No.2002K11G7(3)\]
作者简介：文星(1971)，女(汉族)，主治医师，在读硕士. 就职于中铁一局西安中心医院. Tel: (029) 68801260; Email:xingwen99@126.com
(1. 西安交通大学口腔医学院，陕西西安 710004；2. 中铁一局西安中心医院，陕西西安710054)
(编辑 邱芬)
收稿日期：20050407
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