应用病毒蚀斑法滴定狂犬病毒毒力的方法验证
BHK细胞Vero细胞人用狂犬疫苗病毒滴定蚀斑法PFULD50
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摘要：目的：建立病毒蚀斑法作为狂犬病毒毒力滴定的比较精确的方法。
方法：我们采用比较法，平行测定35批狂犬病Vero细胞疫苗，比较病毒蚀斑法与NIH小鼠法测定狂犬病毒滴度的结果。
结果：病毒蚀斑法和NIH小鼠法具有一定相关性，且判定结果时间由NIH小鼠法测定的21天缩短为病毒蚀斑法测定的10天。
结论：病毒蚀斑法具有快速、经济、操作简单、重复性好等诸多优点，适用于狂犬疫苗生产研究中的病毒毒力滴定。
关键词：BHK细胞Vero细胞人用狂犬疫苗病毒滴定蚀斑法PFULD50
【中图分类号】R4【文献标识码】A【文章编号】1671-8801(2013)04-0007-02
狂犬病毒(RV)属于弹状病毒科狂犬病毒属，是人和动物狂犬病的病原体。外形呈弹状，核衣壳呈螺旋对称，表面具有包膜，内含有单链RNA。能使各种温血动物如狼、狐、猫、牛、羊、马、猪等感染狂犬病。在狂犬病毒的疫苗生产和研制过程中，对病毒毒力的测定是很重要的一步。世界卫生组织的《生物制品规程》狂犬病毒抗原滴度检测的方法建议采用小鼠法和其他适宜的生物学方法。一般实验室采用小鼠LD50法测定，但是由于动物实验需要鉴定员有较高的操作技术，且动物存在个体差异，测定费用较高，测定结果的时间较长等不足之处，国内外已经开始尝试使用蚀斑法进行毒力测定。
细胞培养形成单层后接种病毒形成的蚀斑技术，是较精确地测定病毒感染力的方法。将各稀释度的病毒悬液接种到平皿或细胞培养板中的单层细胞上，先让细胞吸附病毒一定时间，然后在单层细胞上覆盖营养琼脂或者甲基纤维素培养基以限制病毒复制释放后的相对移动，只能感染周围细胞。被感染的细胞由于退化或死亡细胞不能摄入染料，从而形成肉眼可见的不染色区域，称为蚀斑形成单位(PFU)。狂犬病毒的蚀斑形成主要决定条件有两个，一是要有适应细胞培养的病毒株，二是要有敏感的细胞株。本实验室通过大量的实验证明BHK细胞对狂犬病毒(PM株)颇为敏感 ......
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