腺相关病毒ｒＡＡＶ—ＬａｃＺ转导体外培养的骨髓内皮祖细胞

http://www.100md.com 2005年12月1日 陈 锋 谭 最 董长垣 陈 晓 郭淑芳

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     摘要 目的：研究表达β—半乳糖苷酶的重组腺相关病毒(rAAV-LacZ)对于体外培养的骨髓内皮祖细胞(EPCs)的转导效率。方法：将pAAV—LacZ、pAAV-helper、pAAV-RC用磷酸钙法共转染HEK293细胞，得到rAAV—LacZ；用氯仿处理-PEG/NaCl沉淀—氯仿抽提法浓缩纯化病毒；用AVSach^TM ELISA法rAAV2颗粒滴度测定试剂盒测定rAAV-LacZ的滴度；用不同MOl值(1.0×10⁴一1.0×10⁶v·g/cell)的病毒感染EPCs，48 h后，用β—GalELISA试剂盒测定β—半乳糖苷酶的表达，原位β-gal染色试剂盒染色，根据蓝染的阳性细胞占细胞总数的比率来估计rAAVLacZ对于EPCs的转导效率。结果：rAAV-LacZ的滴度为9.6X10¹²v·g·ml^-1；rAAV—LacZ对于EPCs的转导率约为60%，当MOI增加到10⁶v·g/cell时，β—Gal的表达量增至(31.40±2，51)ng·mg·、protein^-1结论：rAAV-LacZ能够有效的转导EPCs，这为AAV载体应用于细胞生长因子与EPCs联合治疗缺血性血管疾病提供实验基础。

    关键词 腺相关病毒；内皮祖细胞；β—半乳糖苷酶

    中图分类号 Q26 文献标识码 A 文章编号 1671—8852(2005)06—0800—04

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