耐拉米夫定乙型肝炎病毒变异株全基因组克隆及鉴定
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摘要 目的：扩增并克隆耐拉米夫定乙型肝炎病毒(HBV)变异株全基因组DNA，为构建含双体HBV YMDDDNA质粒和HBVYMDD变异株细胞模型及研究药物筛选奠定基础。方法：从一名耐拉米夫定的慢性乙型肝炎病人血清中提取HBV病毒DNA，用错配PCR结合限制性片段长度多态性(RFLP)进行变异分析，然后采用PCR方法在HBV负链开环缺口处及基因组中单一酶切点(SpeⅠ)处，设计两对引物从两个方向分别扩增1.15 kb和2.05 kL的单链及双链DNA区，利用基因重组技术，将两片连接后克隆至质粒pcDNA3.1—中，再进行DNA序列测定。结果：错配PCR结合RFLP分析证实该病毒存在YVDD变异，通过两段法克隆出HBV全基因组，经序列分析所得为HBVYMDD变异株全基因组。结论：成功克隆出HBV YMDD变异株全基因组。
关键词 YMDD；拉米夫定；多聚酶基因；乙型肝炎病毒
中图分类号 R373.2+1 文献标识码 A 文章编号 1671—8852(2006)01—0005—04
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