徐文韬,姜思媛,常思琦,张智慧,宋扬扬,张新昌,倪光夏

    (南京中医药大学针灸推拿学院·养生康复学院,江苏 南京 210023)

    早期实施静脉溶栓是目前公认的治疗急性脑梗死的首选方案[1]。在脑梗死发生的超早期进行阿替普酶(rt-PA)溶栓治疗,可有效改善患者的神经功能。但该疗法的使用,有着严格的时间窗(3～4.5 h)[2]限制,一旦超过溶栓时间窗,溶栓治疗的效果会大幅度降低,同时会破坏血脑屏障(Blood brain barrier,BBB),增加出血性转化、脑水肿等溶栓并发症的发生率[3]。然而在现实生活中由于受到多种因素的影响,要在规定的时间窗内进行溶栓治疗难度极大。本课题组前期研究结果初步表明:用针刺早期介入到脑梗死溶栓治疗中,可通过非Caspase通路抑制细胞凋亡,延长溶栓时间窗,从而提高溶栓安全性[4]。现有研究表明,星形胶质细胞是BBB组成之一,其活化标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、水通道蛋白-4(AQP-4)在脑损伤发生过程中的作用不容忽视,且针刺脑保护效应的发挥与调控星形胶质细胞活化程度密切相关[5-7]。但针刺能否通过调控星形胶质细胞活化,减少脑梗死溶栓后BBB的破坏来提高溶栓安全性,目前还缺少深入探索。

    本实验在溶栓治疗基础上配合针刺,论证及时针刺干预的作用,并从星形胶质细胞的途径探讨其可能的机制,为临床针刺提高溶栓安全性提供实验依据。

    1 材料

    1.1 实验动物

    SPF级健康雄性SD大鼠114只,体质量(300±20)g,由浙江维通利华实验动物技术有限公司提供,实验动物许可证号:SCXK(浙)2019-0001。饲养于南京中医药大学实验动物中心,温度20～22 ℃,相对湿度40%～50%,自由摄食饮水。实验通过南京中医药大学实验动物伦理委员会审查,批准号:201906A024。

    1.2 药物、试剂与仪器

    注射用rt-PA(德国Boehringer Ingelheim,批号:901027),凝血酶(美国Sigma,货号:T4648-1KU),TTC(美国Sigma,货号:T8877-50G),EB(美国Sigma),BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)(南京碧云天生物技术有限公司,货号:P0010),逆转录试剂盒[翌圣生物科技(上海)股份有限公司,货号:11123ES60],qPCR试剂盒[翌圣生物科技(上海)股份有限公司,货号:11202ES08],GFAP抗体(美国Affinity,货号:AF6166),GAPDH抗体(美国Affinity,货号:AF7021),AQP-4抗体(武汉三鹰生物技术有限公司,货号:16473-1-AP),β-tubulin抗体[翌圣生物科技(上海)股份有限公司,货号:30302ES20],山羊抗兔IgG(美国Abcam,货号:ab150080) ......