张力，李晓辰，廖太阳，王培民，邢润麟

    (南京中医药大学附属医院/江苏省中医院，江苏 南京 210029)

    膝骨关节炎(Knee osteoarthritis，KOA)是运动系统最常见的退行性疾病之一，滑膜炎症、软骨破坏、骨赘生成是主要病理表现，发病机制至今未能完全明确，因而缺乏有效的针对性治疗方法。中医学多以症状特点将其归入“痹证”“骨痿”范畴[1-2]。软骨破坏是KOA病理进程中的一大核心环节。软骨的合成与分解之间的代谢平衡，在KOA的发生发展中有着至关重要的作用，这一病理环节以软骨细胞为中心[3]。越来越多的研究表明，从衰老角度去认识KOA，代谢因素在其中扮演重要角色。骨性关节炎被部分学者界定为一类代谢性骨病，而代谢综合征甚至被定义为KOA的一种常见亚型[4-5]。作为人体最大的代谢器官，肝脏在人体代谢活动中的作用非常关键。肝脏主要由肝实质细胞(即肝细胞)组成，数量最多，是肝脏代谢功能的主要执行者[6]。

    研究表明，伴随机体衰老，肝细胞会逐渐呈现出细胞衰老表型，即细胞增殖分化能力停止，但细胞的基本功能仍得以保持[7]。在形态上出现细胞体积增大、核内陷、核膜溶解、染色质异常等结构；在功能上出现细胞复制能力丧失、周期停滞、衰老相关基因p16、p21、p53表达上调等[8]。这样的病理改变被证实可推动多类代谢性疾病进展[9-10]。基于在KOA软骨退变中细胞和细胞外基质的代谢紊乱以及肝细胞衰老对代谢功能的影响，二者之间是否存在联系引起相关学者的研究兴趣。

    外泌体是一类由细胞分泌、直径在30～120 nm之间的细胞外囊泡，包裹了多种蛋白质、脂质、核酸等活性物质。其拥有富含受体的脂质膜性结构，可保护膜内miRNA、LncRNA等携带生物信息的活性物质在循环系统稳定传输，介导细胞间通讯、并可能通过远距传输的方式参与组织间对话[11]。研究表明肝细胞来源外泌体参与推动一些代谢类疾病的进程[12]，其对软骨代谢紊乱和最终退变有无作用仍然未知。中医学历来有“肝主筋”“膝为筋之府”的基础理论认识，“柔肝养筋”则是最常见的中医治膝处方选药原则，常用药如白芍、木瓜等[13-15]。既往有研究发现间充质干细胞来源、脂肪细胞来源的外泌体对KOA软骨细胞具有调控作用[16-18]。衰老表型肝细胞是否可能通过外泌体的分泌与软骨细胞形成对话，进而影响KOA软骨细胞的代谢平衡，柔肝养筋类中药是否可以在此环节发挥作用，研究主要是针对此问题开展。

    1 材料与方法

    1.1 试剂与仪器

    RNA快速提取试剂盒(货号：RN001 ......