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编号:12138083
冠心病稳定型心绞痛患者MPO及MMP-9表达变化(2)
http://www.100md.com 2011年6月1日 宋庆桥,李宜,胡元会,冯玲,石洁,吴华芹,曹雪滨,李俊峡
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    参见附件(3186KB,7页)。

     1.3.3.3 主要试剂 MILLIPLEXTMMAP KIT Human Cardiovascular Disease(CVD)Panel1 96well plate AssayCat,No:HCVD1-67AK,试剂批号:16677874。Beads液、QC溶液、wash buffer液、standard液根据说明书配置。

    1.3.3.4 实验步骤 从-80 ℃冰箱中取出病例样品,渐次解冻至室温,离心,以1∶50比例稀释,与梯度稀释的标品一起分别加入96孔板相应的位置,加入25 μL beads震荡10 s,将96孔板用锡纸包好以避光,放置于4 ℃冰箱摇床中以500 RPM孵育17 h后取出室温下以500RPM摇摆30 min, 200 μL Wash Buffer清洗2次,加入25 μL Dection Antibodies 500 RPM摇摆1 h,加入25 μL Streptavidin-phycoerythrin 加入96孔板中的每个孔, 500 RPM摇摆30 min,200 μL Wash Buffer清洗2次,加100 μL鞘液至每个孔,以500 RPM摇摆5 min,参照试剂说明书设定相应参数,将96孔板放在Luminex200液相芯片分析系统同步检测MMP-9及MPO表达。

    1.4 统计学处理 计量资料以均数±标准差(x±s)表示,采用K-S方法检验其是否服从正态分布,对于不服从正态分布的数据进行取对数转换后再次检验其是否服从正态分布。符合正态分布的计量资料之间比较,两组采用t检验,组间比较采用LSD方法。相关性分析采用Person相关检验。以上数据统计采用SPSS 11.5 计算。

    2 结 果

    2.1 一般资料 本次研究共入选206例,其中男135例,女71例;年龄20岁~85岁(60.67岁±9.84岁);病程(45.94±56.92)月。心绞痛程度分级(CCS)1级 28例,2级66例,3级97例,4级15例;合并高血压141例,合并糖尿病42例,合并高脂血症53例,有吸烟史者101例。冠状动脉造影显示1支病变55例,2支病变80例,3支病变71例,冠脉积分(Gensini积分)4分~120分(29.32分±22.71分);病变血管涉及左主干23例,左前降支161例,右冠状动脉106例,左回旋支101例,共涉及391处病变。

    数据预处理:两指标分布均不服从正态分布,经转换后均符合正态分布(见表1)。

    表1 冠心病心绞痛患者血清MPO及MMP-9表达

    2.2 MPO、MMP-9表达(见表2)

    表2 两组MPO、MMP-9表达水平(x±s)mg/L

    2.3 冠心病稳定型心绞痛患者MPO、MMP-9与冠状动脉病变程度相关性 MPO与MMP-9之间有显著相关性(P<0.01),二者与Gensini积分无明显相关性。详见表3。表3 冠心病稳定型心绞痛患者冠脉病变程度、MPO及MMP-9相关性

    3 讨 论

    MPO是一种血色素蛋白(hemoprotein),由2个55 Kda的亚单位和2个15 Kda的亚单位组成的分子量为140 Kda的四聚体糖基化蛋白,占所有细胞蛋白质总量的4%,在循环中的MPO,95%是由中性多形核白细胞(polymorphonuclear neutrophils,PMNs)中嗜天青颗粒所分泌。MPO通过氯化过氧化氢、催化产生次氯酸等反应性物质和多种自由基,维持细胞氧化还原自稳状态。当机体处于炎症、氧化应激状态时,不能有效清除自由基核氧化剂,引起多种病理过程和组织损伤【sup】[4,5]【/sup】。

    冠状动脉粥样硬化作为一种慢性炎症过程,以动脉血管壁中脂质、炎症细胞核坏死物聚集为主要特征。粥样斑块的形成机制、并发症及其早期检测指标一直是体内外实验和临床研究的热点。MPO通过结合整合素CD11b/CD18介导中性粒细胞活化,是后者活化的自分泌和旁分泌细胞因子,发挥正反馈的调节作用,是中性粒细胞活化的标志物【sup】[6]【/sup】。ACS患者冠脉管壁炎性反应较显著,故MPO表达升高明显,因此,研究者认为其可以作为急性冠脉综合征或者胸痛的预测指标【sup】[7,8]【/sup】。临床研究表明,冠心病ACS患者MPO表达显著高于健康者、冠脉造影阴性以及稳定型心绞痛患者【sup】【/sup】[9,10]。刘志远等【sup】[11]【/sup】进行亚组分析表明,急性心肌梗死、不稳定型心绞痛患者血清MPO浓度显著高于稳定型心绞痛患者及对照组(冠脉造影正常)。欧阳茂等【sup】[12]【/sup】研究表明,ACS患者MPO浓度显著高于稳定型心绞痛患者和对照组,高浓度MPO患者半年心脏事件发生率升高。有关MPO基因多态性研究表明其与冠状动脉疾病关系密切【sup】[13]【/sup】。

    MMP-9属于明胶酶,在MMPs中复杂程度较高,主要参与降解Ⅳ~Ⅺ型胶原和明胶、纤维连接蛋白、弹性蛋白等。因此,MMP-9对于血管再生、炎性反应、动脉硬化斑块的形成及其发展进程中起重要作用。多数关于MMP-9与冠心病关系的研究表明【sup】【/sup】[14-17],MMP-9在ACS中升高,稳定性冠心病(SCHD)和正常对照组则不升高。然而临床研究中亦有不同的研究结果。一项关于SCHD患者的冠脉造影研究【sup】[18]【/sup】发现,相比于对照人群,冠心病患者血浆MMP-9(P0.0099)、 TIMP-2(P0.0019)和 sCD40L(P<0.001)升高,并且将来深入研究可能探索其中潜在联系。

    本研究表明,MPO、MMP-9在冠心病稳定型心绞痛患者血清表达显著升高,提示SAP患者其冠脉硬化斑块在一定程度上不稳定。稳定型心绞痛与不稳定型心绞痛是人为的界定,其间并非截然分开的。动脉硬化斑块由稳定向不稳定发展是一个渐进的过程。在这个过程中,其冠脉病变斑块的形态、患者症状可能没有显著改变,因此,冠脉病变程度Gensini积分与MPO、MMP-9表达无明显相关性 ......

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