丁苯酞对AD大鼠模型海马BACE及NEP活性含量的影响(1)
参见附件(12kb)。
摘要：目的 探讨丁苯酞对AD大鼠模型海马组织β分泌酶(BACE)和中性内肽酶(NEP)活性含量的影响。方法 选用健康雄性Wistar大鼠40只，随机分为4组，假手术组、模型组、丁苯酞低剂量组、丁苯酞高剂量组。采用大鼠海马立体定向注射凝聚态Aβ1-40诱导AD模型，灌胃时间为4周，以ELISA 法测定海马组织匀浆中β-分泌酶及中性内肽酶的活性含量。结果 用药组大鼠海马组织β-分泌酶的活性含量没有明显降低，与模型组之间差异无统计学意义(P>0.05)；用药组大鼠海马组织中性内肽酶的活性含量明显升高，与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)，但丁苯酞低剂量组与高剂量组之间差异无统计学意义。结论 丁苯酞可以促进AD大鼠模型海马组织的中性内肽酶的活性含量，并可能通过促进其活性含量加速Aβ的降解，但对于β分泌酶却没有明显的影响。
关键词：阿尔茨海默病；丁苯酞；β分泌酶；中性内肽酶
中图分类号：R749.1 R255.2 文献标识码：A 文章编号：1672-1349(2011)07-0844-02
阿尔茨海默病为神经系统退行性疾病，是老年性痴呆的主要类型之一，其发病机制尚未阐明，但较为公认的是Aβ级联假说[1]。Aβ在颞叶、海马的沉积可引起细胞内钙稳态失衡、氧化应激、炎症免疫、细胞凋亡、线粒体损伤、胆碱能系统的损伤等，最终引起神经元的丧失，产生记忆力及认知的下降。因此，Aβ在AD的发病中起着关键性作用，而减少Aβ沉积成为治疗AD的一条重要途径。丁苯酞可以减少AD模型大鼠海马Aβ的沉积[2]，其可能机制之一是促进α分泌酶的表达[3]，但丁苯酞是否会影响Aβ代谢其他重要途径尚不清楚。β分泌酶(BACE)是Aβ产生过程中第一个限速酶，而中性内肽酶(NEP)是脑内重要的Aβ降解酶。本实验通过检测影响Aβ代谢BACE和NEP，探讨丁苯酞减少AD大鼠模型脑内Aβ沉积的可能机制。
1 材料与方法
1.1 动物与分组 健康雄性Wistar 大鼠40只(山西医科大学实验动物中心提供)，体重280 g～320 g。随机分为4 组：假手术组、模型组、丁苯酞低剂量组、丁苯酞高剂量组，每组各10只，自由进食、饮水，自然昼夜节律光照。
1.2 药品、试剂与仪器 丁苯酞(恩必普，NBP)由石药集团恩必普药业有限公司提供；Aβ1-40蛋白片段(北京博奥森)；大鼠脑内β-分泌酶、中性内肽酶活性ELISA 试剂盒(美国R&D)；江湾1C型脑立体定位仪；FA 2004/1104型电子天平(上海天平仪器厂)；玻璃匀浆器(天津科器集团公司)；离心机(LD5-2A，北京医用离心机厂)；电热恒温培养箱Jc303型(上海成顺仪器仪表有限公司)；Wellscan MK-3 全自动多功能酶标仪(芬兰Labsystems Dragon公司)。
1.3 模型建立及给药 采用大鼠海马立体定向注射凝聚态Aβ1-40诱导AD模型[3]。将丁苯酞溶于植物油中，制成浓度为10 mg/mL植物油与药物混合物进行灌胃；根据人和动物按体表面积折算的等效剂量，丁苯酞高剂量组按60 mg/kg给药，丁苯酞低剂量组按30 mg/kg给药，假手术组和模型组大鼠给予等体积植物油，造模手术后第一天即给药，灌胃共4周，均每日1次灌胃。
1.4 海马组织匀浆β分泌酶及中性内肽酶的活性含量测定 灌胃满4周后处死大鼠，进行麻醉，快速断头，在冰盘上迅速将两侧海马剥离(右侧海马用以β分泌酶的检测，左侧海马用以中性内肽酶的检测)，用冰冷的生理盐水冲净海马表面血迹，滤纸拭干，后以电子天平称重；按1 g∶10 mL冰水溶液中用玻璃匀浆器研磨制成匀浆，4℃ 3 500r/min离心10 min，取上清液，制成10%海马脑组织匀浆。用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(OD 值)，通过标准曲线计算样品中大鼠海马组织匀浆中β分泌酶及中性内肽酶的活性含量。
1.5 统计学处理 计量资料以均数±标准差(x±s)表示。用SPSS 13.0软件处理，采用单因素方差分析。
2 结 果
2.1 β分泌酶的活性含量(见表1) 与假手术组相比，模型组大鼠海马组织匀浆中β分泌酶的活性含量明显增加(P<0.01)；但与模型组比较，丁苯酞低剂量组、高剂量组β分泌酶的活性含量没有明显降低；低、高剂量丁苯酞组β分泌酶的活性含量差异也无统计学意义。
表1 丁苯酞对AD大鼠海马BACE活性含量的影响(x±s)
2.2 中性内肽酶活性 与假手术组大鼠相比，模型组大鼠海马组织匀浆的中性内肽酶活性明显增加(P<0.01)；与模型组比较 ......
摘要：目的 探讨丁苯酞对AD大鼠模型海马组织β分泌酶(BACE)和中性内肽酶(NEP)活性含量的影响。方法 选用健康雄性Wistar大鼠40只，随机分为4组，假手术组、模型组、丁苯酞低剂量组、丁苯酞高剂量组。采用大鼠海马立体定向注射凝聚态Aβ1-40诱导AD模型，灌胃时间为4周，以ELISA 法测定海马组织匀浆中β-分泌酶及中性内肽酶的活性含量。结果 用药组大鼠海马组织β-分泌酶的活性含量没有明显降低，与模型组之间差异无统计学意义(P>0.05)；用药组大鼠海马组织中性内肽酶的活性含量明显升高，与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)，但丁苯酞低剂量组与高剂量组之间差异无统计学意义。结论 丁苯酞可以促进AD大鼠模型海马组织的中性内肽酶的活性含量，并可能通过促进其活性含量加速Aβ的降解，但对于β分泌酶却没有明显的影响。
关键词：阿尔茨海默病；丁苯酞；β分泌酶；中性内肽酶
中图分类号：R749.1 R255.2 文献标识码：A 文章编号：1672-1349(2011)07-0844-02
阿尔茨海默病为神经系统退行性疾病，是老年性痴呆的主要类型之一，其发病机制尚未阐明，但较为公认的是Aβ级联假说[1]。Aβ在颞叶、海马的沉积可引起细胞内钙稳态失衡、氧化应激、炎症免疫、细胞凋亡、线粒体损伤、胆碱能系统的损伤等，最终引起神经元的丧失，产生记忆力及认知的下降。因此，Aβ在AD的发病中起着关键性作用，而减少Aβ沉积成为治疗AD的一条重要途径。丁苯酞可以减少AD模型大鼠海马Aβ的沉积[2]，其可能机制之一是促进α分泌酶的表达[3]，但丁苯酞是否会影响Aβ代谢其他重要途径尚不清楚。β分泌酶(BACE)是Aβ产生过程中第一个限速酶，而中性内肽酶(NEP)是脑内重要的Aβ降解酶。本实验通过检测影响Aβ代谢BACE和NEP，探讨丁苯酞减少AD大鼠模型脑内Aβ沉积的可能机制。
1 材料与方法
1.1 动物与分组 健康雄性Wistar 大鼠40只(山西医科大学实验动物中心提供)，体重280 g～320 g。随机分为4 组：假手术组、模型组、丁苯酞低剂量组、丁苯酞高剂量组，每组各10只，自由进食、饮水，自然昼夜节律光照。
1.2 药品、试剂与仪器 丁苯酞(恩必普，NBP)由石药集团恩必普药业有限公司提供；Aβ1-40蛋白片段(北京博奥森)；大鼠脑内β-分泌酶、中性内肽酶活性ELISA 试剂盒(美国R&D)；江湾1C型脑立体定位仪；FA 2004/1104型电子天平(上海天平仪器厂)；玻璃匀浆器(天津科器集团公司)；离心机(LD5-2A，北京医用离心机厂)；电热恒温培养箱Jc303型(上海成顺仪器仪表有限公司)；Wellscan MK-3 全自动多功能酶标仪(芬兰Labsystems Dragon公司)。
1.3 模型建立及给药 采用大鼠海马立体定向注射凝聚态Aβ1-40诱导AD模型[3]。将丁苯酞溶于植物油中，制成浓度为10 mg/mL植物油与药物混合物进行灌胃；根据人和动物按体表面积折算的等效剂量，丁苯酞高剂量组按60 mg/kg给药，丁苯酞低剂量组按30 mg/kg给药，假手术组和模型组大鼠给予等体积植物油，造模手术后第一天即给药，灌胃共4周，均每日1次灌胃。
1.4 海马组织匀浆β分泌酶及中性内肽酶的活性含量测定 灌胃满4周后处死大鼠，进行麻醉，快速断头，在冰盘上迅速将两侧海马剥离(右侧海马用以β分泌酶的检测，左侧海马用以中性内肽酶的检测)，用冰冷的生理盐水冲净海马表面血迹，滤纸拭干，后以电子天平称重；按1 g∶10 mL冰水溶液中用玻璃匀浆器研磨制成匀浆，4℃ 3 500r/min离心10 min，取上清液，制成10%海马脑组织匀浆。用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(OD 值)，通过标准曲线计算样品中大鼠海马组织匀浆中β分泌酶及中性内肽酶的活性含量。
1.5 统计学处理 计量资料以均数±标准差(x±s)表示。用SPSS 13.0软件处理，采用单因素方差分析。
2 结 果
2.1 β分泌酶的活性含量(见表1) 与假手术组相比，模型组大鼠海马组织匀浆中β分泌酶的活性含量明显增加(P<0.01)；但与模型组比较，丁苯酞低剂量组、高剂量组β分泌酶的活性含量没有明显降低；低、高剂量丁苯酞组β分泌酶的活性含量差异也无统计学意义。
表1 丁苯酞对AD大鼠海马BACE活性含量的影响(x±s)
2.2 中性内肽酶活性 与假手术组大鼠相比，模型组大鼠海马组织匀浆的中性内肽酶活性明显增加(P<0.01)；与模型组比较 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(12kb)。