Rt-PA在血脑屏障氧糖剥夺体外模型中对神经细胞保护的研究
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胡俊 陈旭辉 吴军 北京大学深圳医院;
【摘要】目的观察重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)在体外血脑屏障氧糖剥夺模型中对神经细胞的影响,探讨rt-PA对脑缺血神经元的保护作用。方法利用Transwell培养小室为支架,构成以人血管上皮细胞为基础的体外血脑屏障模型;利用厌氧培养箱及无糖培养液,建立体外缺血缺氧模型;在体外缺血缺氧模型基础上,采用组织培养技术,培养神经细胞,并在缺血缺氧条件下,使用MTT法进行检测不同剂量rt-PA对神经细胞活性的影响。结果分别在氧糖剥夺实验(OGD)及非OGD条件下,在不同rt-PA药物的浓度作用下,低浓度(0.312 5μg/mL)对非OGD条件下神经细胞的生长有促进作用,在OGD条件下,低浓度(0.625μg/mL,0.312 5μg/mL)对神经细胞同样具有保护作用。结论 rt-PA可能对脑缺血后神经细胞存在保护作用,并与rt-PA的剂量相关,在OGD条件下,低剂量rt-PA对神经细胞的保护作用更为显著。
【关键词】 重组组织型纤溶酶原激活剂 血脑屏障模型 氧糖剥夺 神经细胞
【基金】广东省深圳市科技计划基金资助项目(No.201103016)
【分类号】R741
重组组织型纤溶酶原激活剂(recombinant tissue-typeplasminogen activator,rt-PA)是丝氨酸蛋白酶家族的一员,主要作用是激活纤溶酶原转变为纤溶酶。rt-PA对血栓的选择性高,半衰期短,无抗原性;是迄今为止唯一被美国FDA批准用于急性脑梗死的溶栓药物,可溶解血栓,早期开通闭塞
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1.2.2 海马神经元原代培养 海马神经元取自C57BL/6新生鼠，75%乙醇消毒 ，取出大脑置于冷的Hanks平衡盐溶液中，迅速剥离分出两侧海马组织，转移至0.25%的胰酶中37 ℃消化15 min。血清终止消化，1 500 r/min，4 ℃离心10 min以沉降组织。用冷的10% DMEM清洗组织一次，离心后重悬，吹打使组织成单细胞悬液，调整细胞密度为5×104/mL。接种于多聚鸟氨酸处理的培养瓶、24孔板与96孔板中。培养第2天将DMEM培养液换成神经元培养液(配方如下)，每周进行两次换液。
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