HIF-1α及其抑制剂对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时神经细胞凋亡的影响(2)
 |
| 第1页 |
参见附件。
2.2.2 Bax的表达 光镜下观察：Bax阳性染色呈棕黄色的细颗粒沉积，阳性细胞表达主要见于大脑皮层和海马，阳性着色主要位于神经元胞浆。阴性对照切片中免疫反应产物明显减少。 Bax在Sham组各时间点低水平表达；在HIBD组，于HIBD后3 h即明显增强，至24 h达高峰，之后降低，但始终高于Sham组(P<0.05)；2ME2组各时间点Bax的表达趋势先降低后升高，24 h表达最低，各时间点表达水平较HIBD组明显降低(P<0.05)。详见表2。
2.2.3 Bcl2的表达 Bcl2阳性染色呈棕黄色的细颗粒沉积，阳性细胞表达主要见于大脑皮层和海马，阳性着色主要位于神经元胞浆。阴性对照切片中免疫反应产物明显减少。Bcl2在Sham组各时间点呈低水平表达；在HIBD组于HIBD后3 h增强，至24 h达高峰，之后降低，但始终高于Sham组(P<0.05)；2ME2组各时间点的表达趋势同HIBD组，表达量升高，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表3。
2.2.4 Bax/Bcl2灰度值的比值 Sham组为1.08±0.54；HIBD组3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d各亚组为0.83±0.07、0.82±0.07、0.82±0.05、0.85±0.09、0.89±0.06、0.91±0.06、0.98±0.07；2ME2组各亚组的比值为 0.96±0.08、1.07±0.13、1.27±0.14、1.68±0.14、1.27±0.17、1.27±0.14、1.23±0.25。与Sham组比较，HIBD组各个时间点的Bax/Bcl2平均灰度值比值均低，即表达量比值高，即脑组织的损伤较Sham组重。2ME2组各时间点的Bax/Bcl2平均灰度值比值较HIBD组均高，即表达量比值较低，提示脑组织的损伤较HIBD组减轻。与Sham组比较，12 h之前，2ME2组平均灰度值比值较低，而之后较高，表明12 h之内仍表现为对脑组织的损伤作用，12 h之后则表现为保护作用。
2.3 脑细胞凋亡情况 TUNEL阳性细胞呈深褐色，主要见于大脑皮层和海马区。HIBD组的脑细胞凋亡最多，2ME2组较之明显减少，Sham组凋亡细胞少见。详见表4。
3 讨 论
HIF1对维持机体的氧平衡有重要作用，由HIF1α和HIF1β两个亚基组成，其中HIF1α亚基在缺氧诱导的细胞凋亡中起关键作用[5]。本实验结果显示，HIF1α的表达在缺氧缺血先升高后降低，考虑与复氧后泛素系统的活性恢复、HIF1α降解增加有关。有关HIF1α在缺氧缺血性脑损伤中究竟是促进还是抑制细胞凋亡，目前尚存在争议。
Bax在未成熟脑中呈高表达，Bax依赖性的细胞凋亡机制在未成熟脑中占明显优势[6]。Bcl2家族蛋白在细胞凋亡的调节中发挥关键作用[7]。本实验选用的指标Bax和 Bcl2分别是Bcl2家族蛋白中促凋亡和抗凋亡的重要成员，参与Bax依赖性的细胞凋亡机制。
2ME2是雌激素的正常代谢产物，存在于人体的血液与尿液中，是一种有效的缺氧诱导因子 1α阻滞剂，且专一的影响H IF1α亚基，并没有影响HIF1β或其他转录因子[8]。本研究结果显示，应用2ME2抑制HIF1α后，HIF1α在HIBD后的表达明显降低，促进凋亡的蛋白Bax的表达明显降低，抑制凋亡的蛋白Bcl2的表达明显升高，引起Bax/Bcl2表达量比值降低，最终脑细胞凋亡明显减少，脑损伤减轻，表明HIF1α的过度表达对缺氧缺血性脑损伤是有害的，这与Helton等[9]和Chang等[4]的结果是一致的。Helton和Chang等分别通过特异性的敲除脑组织的HIF1α基因和使用川芎嗪抑制HIF1α后发现缺氧缺血性脑损伤减轻。另外Calvert等[10]指出高压氧和正常氧治疗后，HIF1α的表达较非治疗组均降低，而脑损伤减轻，也可以从一个侧面反映HIF1α的过度表达对HIBD是有害的。
然而也有报告如Baranova等[11]认为神经元特异性的失活HIF1α会增加短暂局灶性脑缺血损伤， HIF1α整体上来说介导的是一个有益的反应。有意义的是Baranova等[11]研究证实,对野生型小鼠MCAO(大脑中动脉缺血) 6 h～12 h后缺氧缺血区的促凋亡基因BNIP3和NIX在mRNA 和蛋白水平均上升,在缺氧缺血急性期(<12 h)HIF1α促进细胞凋亡。这和本研究的结果是相同的。因此，推测 2ME2发挥神经保护作用的机制是它在缺氧缺血早期抑制HIF1α表达从而减少此时的促凋亡基因的表达。然而，2ME2的其他性质已报告，如抗新血管生成和改变炎症反应等，这些性质本身也可以减轻缺氧缺血性脑损伤。本实验尚不能肯定2ME2的神经保护作用是通过抑制HIF1α表达产生的，尚待进一步的研究证实。
另有报告，如Sheldon等[12]采用Cre/Lox技术使前脑主要的神经元特异性的失活HIF1α,认为HIF1α缺失会增加新生儿缺氧缺血性脑损伤。但是这个模型中小鼠在缺氧环境中仅仅暴露30 min，产生的是中度的脑损伤，这与本实验缺氧程度、动物种类及模型制备等是不同的 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(3576kb)。