1.4.1 RNA提取 弃培养瓶中的培养液，每瓶加入1.0 mL Trizol，依次加入氯仿、异丙醇沉淀，75%乙醇洗涤后略晾干，溶于25 μL DEPC中。核酸紫外分析仪检测，根据260/280比值，所有样品的A260/ A280的比值均介于1.9～2.0。并根据260 nm 的吸光度值对样品的总RNA进行初步定量，确定样品中RNA纯度和含量。

    1.4.2 逆转录反应 逆转录反应在20 μL体系中进行：含1 μg RNA，20 mg/L的oligo(dT)引物，1.0 mmol/L dNTP，20 U Rnase抑制剂，1×Buffer，200UMMLV逆转录酶。于PCR仪上42 ℃反应1 h，72 ℃灭活10 min后保存于-20 ℃冰箱中。

    1.4.4 凝胶电泳 取PCR产物10 μL在琼脂糖凝胶上电泳，计算机凝胶成像系统扫描拍照，Toptal软件分析灰度值，以各条带与Bactin内参条带灰度的比值，代表MMP9mRNA转录水平。

    1.5 酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA法)测定MMP9蛋白含量的表达 六孔培养板的上清液进行酶联免疫吸附双抗夹心法(enzyme linked immunosorbent assay ......