方雅琴，邱 龄

    同型半胱氨酸(Hcy)曾被认为是与冠心病发生发展密切相关的危险因素，但近年几个大型补充叶酸及维生素B12降低高Hcy血症的临床实验结果彻底否定了上述观点，证实降低Hcy无预防心血管事件发生的作用。很多研究发现血浆中非对称性二甲基精氨酸(ADMA)与血管内皮功能失调关系密切。国外实验已发现[1]，在动物和人类中高Hcy血症常伴有ADMA浓度增高。Ⅰ型蛋白精氨酸甲基转移酶(PRMTⅠ)是 Hcy与ADMA的合成代谢通路交点上关键的限速酶，其基因表达及活性的增高在理论上可引起血浆 Hcy、ADMA增高，研究发现PRMT1在冠心病病人心肌组织中过度表达[2]，从而推测该酶是引起冠心病发病同时Hcy及ADMA水平升高的重要危险因素。本实验在前期试验基础上观察pPRMT1-shRNA质粒在体外转染大鼠主动脉内皮细胞，对PRMT1基因mRNA表达和Hcy、ADMA水平的影响。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂与实验仪器 细胞总RNA抽提试剂盒Trizol及逆转录酶、RNasin、dNTP购自上海生工生物工程技术有限公司，PCR引物购自Invitrogen公司，RT-PCR试剂盒美国Fermentas公司，DNA Marker购自大连宝生物有限公司，IX51荧光倒置显微镜为日本Olympus公司生产，ELISA法ADMA检测试剂盒及Hcy检测试剂盒(上海西唐生物科技有限公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞转染 转染前1d，在6孔板中进行细胞铺板，每孔接种3.0×105个细胞，孵育过夜。观察达到转染要求时，以每两孔为一组，共分为4组。空白对照组：未作任何处理；阴性对照 质 粒 组 ：转 染pHK；pPRMT 1-shRNA 1组 ；pPRMT 1-shRNA2组。按质粒3.0μg、jetPEITM-RGD 6μL制备转染复合物。分别于转染后12h和24h收集4组细胞和上清液，用RT-PCR检测各组PRMT1基因的表达。

    1.2.2 RT-PCR检测各组PRMT1基因的表达 细胞总RNA的提取按照Trizol试剂说明书 ......