刘中勇，李 林，方 家，陈宁南，邓 鹏，方险峰，邹国辉

    中医学认为妇女在绝经后机体开始向老年过渡。此时肾气渐衰、天癸渐竭，女子以血为用，因数脱于血，且精血同源，故绝经后相关疾病以肾阴虚者多见[1，2]。在更年期综合征中医研究中，本病大多被认为属肾阴亏虚[3，4]。中医证型与性激素相关性研究也表明，促卵泡生成激素(FSH)、促黄体生成素(LH)升高，雌二醇(E2)下降，血清中NO水平明显降低均为肾阴虚型[5，6]。肾为先天之本，通过其“藏精化血”，“主骨生髓、髓生血”的功能直接参与气血活动，由于肾与血在生理上关系密切，因此，在病理上近代有关“肾虚血瘀”的论述颇多，认为肾虚必兼血瘀。“肾虚血瘀”也是妇女发生绝经后冠心病(coronary heart disease，CHD)的主要病机[7，8]。应用原代培养的人脐静脉内皮细胞作为载体，加入eNOS抑制剂L-NAME处理细胞，制备NO低表达细胞模型，观察补肾活血方剂对原代细胞NO分泌的提高作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料 标本采自江西中医药大学妇产科正常分娩的新生儿脐带。健康孕妇剖宫产后，无菌条件下剪取脐带20cm，浸泡在磷酸盐缓冲液中。立即对脐静脉内皮细胞(HUVEC)进行分离培养。

    1.2 仪器及试剂 DMEM培养基GIBCO公司，0.25%胰酶(广州杏海生物，Ginbio)，Ⅷ抗体(武汉博士德)，I型胶原酶(sigma公司)，FITC标记荧光二抗(武汉博士德)，胎牛血清(杭州四季青)，青链霉素双抗(广州杏海生物，Ginbio)，NO检测试剂盒(上海碧云天)，倒置显微镜(NIKO)，荧光显微镜 (Leica)，超净工作台(江苏苏净)，酶标仪(BIOTEK)。

    1.3 样品采集 取剖宫产新生儿脐带，注入NaCl至静脉另一端流出液体透明为止。把37℃预热的0.1%Ⅰ型胶原酶注入脐静脉至下端溶液流出，用止血钳夹闭下端静脉，继续向静脉内注入胶原酶，用另一个止血钳夹闭静脉上端，将脐带放入37℃CO2孵育箱中消15min。消化完毕后，松开脐带两端止血钳 ......