王建刚，田首元

    参附注射液(Shen-fu injection，SFI)是临床上常用的中药，其主要药理成分为人参皂苷和乌头碱，对心肌缺血/再灌注损伤具有保护作用[1，2]，但其作用机制还有待探讨。本研究采用原代培养的心肌细胞建立缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation，H/R)损伤模型模拟体内缺血/再灌注损伤，研究SFI对体外培养的心肌细胞H/R损伤的保护作用，并对其作用机制进行探讨。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂及仪器 参附注射液(批号：041105，雅安三九药业有限公司)，胎牛血清、低糖DMEM培养基、高糖DMEM培养基(Hyclone公司，美国)，胰蛋白酶(Amresco公司，美国)，倒置相差显微镜(Olympus Optical公司，日本)，CO2恒温细胞培养箱(Forma Scientific公司，美国)。5-溴-2-脱氧尿核苷(5-bromo-2-deoxyuridine，BrDU)。DXC800型全自动生化分析仪、Access2型免疫化学发光分析仪(Beckman公司，美国)，超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。EPICS Elite型流式细胞仪(Beckman coulter公司，美国)。

    1.2 原代心肌细胞培养 取出生1d～3dWistar乳鼠，雌雄不限(山西医科大学动物中心提供)，75%酒精浸泡后，无菌条件下取其心脏置于预先盛有D-Hanks液的无菌平皿内，用含抗生素的D-Hanks灌冲洗两遍。取心室肌剪碎至1mm3～2 mm3大小的组织块，移入5 0mL离心管中，用适量预温的0.125%胰蛋白酶和0.01%EDTA 37℃水浴震荡分次消化，每次约8min，直至组织块完全消化。收集除第1次以外的单细胞悬液，放入含有10%胎牛血清的DMEM培养液中，终止消化7目筛网过滤去除未消化的组织，在4℃时以1 000r/min离心10min ......