梁俊红，曹锡梅，万东方，张 潮，郭大玮

    动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是心脑血管疾病的主要病理基础，引起AS的病因很复杂。巨噬细胞在其发生、发展过程中有重要作用[1，2]。抑制巨噬细胞的炎症反应有可能成为预防和治疗AS的一个重要的方向。已知人单核白血病(THP-1)细胞具有单核细胞和巨噬细胞的功能和生理学特性，被广泛用于毒理学、免疫学和动脉粥样硬化等研究领域[3]。而G-细菌细胞膜的主要成分脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)可以刺激单核巨噬细胞系统发生免疫反应[4]。明确LPS刺激THP-1细胞的基因转录水平将有助于揭示AS的病因。

    实时定量PCR(RT-qPCR)较普通PCR定量准确、重现性好、灵敏度高，已经成为分析基因转录水平的首选方法[5-7]。然而，多种变量因素影响其数据处理和结果分析，如提取RNA的质量、酶的效率(反转录效率，扩增效率)等等。为了去除这些变量可能存在的差别而获得目标基因特异性表达的真正差异，实验者通常选择表达稳定的单一内参基因GAPDH或ACTB进行校正和标准化。然而越来越多的研究表明，某些条件下稳定表达的内参基因变得不再稳定[8，9]。为了确保RT-qPCR结果的可靠性，Bustin等[10]针对实验中的种种问题提出一套标准指南(MIQE指南)。本研究依据该标准指南共选取10个候选看家基因：ACTB、GAPDH、RPL37A、PPIB、PGK1、PPIA、SDHA、TBP、HPRT1、RPL13A ，通过 SYBR-Green RT-qPCR技术对LPS刺激THP-1细胞的基因转录水平进行检测，评估不同条件下适合此细胞基因表达水平研究的内参基因，以确保后期RT-qPCR实验结果的准确性和可靠性。

    1 材料与方法

    1.1 THP-1细胞培养与样本采集 THP-1细胞购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库(TCHu-57)，用含10%FBS(Gibco 10099-141，购自北京茂建)的 RPMI-1640(Hyclone，SH30809.01B)培养基，37℃，5%CO2的细胞培养箱培养。稳定培养传2代～3代后给予Lipopolysaccharide(LPS，Sigma，L2880，10μg/mL)刺激。实验设计LPS刺激 THP-1细胞不同时间点：LPS刺激0h、2h、6h、12h、24h ......