G—CSF对创伤性脑损伤大鼠神经再生作用的研究(2)
参见附件。
1.3.3 BrdU/NeuN双标染色 同上5%正常山羊血清封闭后，滴加1∶100 的小鼠抗BrdU和1∶150兔抗大鼠NeuN(北京博奥森)混合一抗，4 ℃冰箱过夜，PBS洗5 min×3次，滴加1∶50的山羊抗小鼠IgG荧光FITC和1∶50山羊抗兔IgG荧光CY3(北京博奥森)混合二抗，避光37 ℃温箱孵育60 min，PBS洗8 min×3次，缓冲甘油封片，同上荧光显微镜下观察并计数双阳性细胞数。
1.4 统计学处理 运用SPSS13.0统计学软件对实验数据进行处理，所有数据以均数±标准差(x±s)表示，采用析因设计的方差分析，组间比较用LSD-t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 神经功能评分 脑创伤后大鼠都有不同程度的神经功能缺失，术后2 d最重，后随时间延长逐渐恢复。G-CSF组在第1 d时mNSS评分和TBI组比较差异无统计学意义，于第4 d、7 d、14 d时mNSS评分明显低于TBI组，差异有统计学意义(P<0.05)，Sham组各时间点mNSS评分基本没有变化。详见表1。
3 讨 论
近年来研究发现，G-CSF及其受体(G-CSFR)在正常脑组织中有少量表达，当脑组织受到损伤时，可见损伤灶及周围脑组织G-CSF/G-CSFR表达明显增加，给予外源性的G-CSF可以通过血脑屏障，并结合于神经细胞膜上的G-CSFR ......
1.3.3 BrdU/NeuN双标染色 同上5%正常山羊血清封闭后，滴加1∶100 的小鼠抗BrdU和1∶150兔抗大鼠NeuN(北京博奥森)混合一抗，4 ℃冰箱过夜，PBS洗5 min×3次，滴加1∶50的山羊抗小鼠IgG荧光FITC和1∶50山羊抗兔IgG荧光CY3(北京博奥森)混合二抗，避光37 ℃温箱孵育60 min，PBS洗8 min×3次，缓冲甘油封片，同上荧光显微镜下观察并计数双阳性细胞数。
1.4 统计学处理 运用SPSS13.0统计学软件对实验数据进行处理，所有数据以均数±标准差(x±s)表示，采用析因设计的方差分析，组间比较用LSD-t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 神经功能评分 脑创伤后大鼠都有不同程度的神经功能缺失，术后2 d最重，后随时间延长逐渐恢复。G-CSF组在第1 d时mNSS评分和TBI组比较差异无统计学意义，于第4 d、7 d、14 d时mNSS评分明显低于TBI组，差异有统计学意义(P<0.05)，Sham组各时间点mNSS评分基本没有变化。详见表1。
3 讨 论
近年来研究发现，G-CSF及其受体(G-CSFR)在正常脑组织中有少量表达，当脑组织受到损伤时，可见损伤灶及周围脑组织G-CSF/G-CSFR表达明显增加，给予外源性的G-CSF可以通过血脑屏障，并结合于神经细胞膜上的G-CSFR ......
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