陈克芳，李建军，潘爱珍，侯祥平

    急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)早期心肌细胞丢失的主要方式为细胞凋亡，凋亡通路的激活决定细胞凋亡的进行，而细胞凋亡通路主要包括半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)信号途径和不依赖于caspase的两种信号通路，依赖于caspase的信号途径主要为线粒体途径。我们早期的实验已经证实，山茱萸总苷可以抑制急性缺氧时心肌细胞的凋亡[1]，但具体机制尚不清楚，而线粒体的能量耗竭及活性氧的释放是导致急性心肌梗死时心肌细胞坏死、凋亡的主要病理改变，因此认为山茱萸与线粒体之间必然存在一定的联系。本实验从对心肌细胞凋亡线粒体通路中caspase-9的研究来探明山茱萸总苷抑制心肌细胞凋亡的机制，为开发治疗心肌梗死的天然药物提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 动物 出生1 d～3 d的SD大鼠，由中山大学实验动物中心提供。

    1.2 试剂 DMEM/F12培养基，吉诺生物医药技术有限公司产品；DMEM无糖培养基，Gibco公司产品；胎牛血清，Gbico公司产品；0.25%胰蛋白酶，吉诺生物医药技术有限公司产品；青霉素-链霉素溶液，Gibco公司产品；抗α-Sarcomeric actin，武汉博士德生物有限公司产品；SABC抗caspase-9试剂盒及DAB显示试剂盒，武汉博士德生物有限公司产品。

    1.3 药物 山茱萸，广东一方制药有限公司提供。

    1.4 主要仪器 CO2细胞培养箱，Thermo公司提供。

    1.5 方法

    1.5.1 山茱萸总苷提取物制备 广东省中医研究所按文献[2]方法提取，提取物浓缩干燥至粉末状。

    1.5.2 心肌细胞原代培养 将出生1 d～3 d的SD大鼠，用75%酒精消毒后取出心脏 ......