常煜胤，路 明，卢太苓，丁 洁

    川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心脏成纤维细胞纤维化的影响

    常煜胤，路 明，卢太苓，丁 洁

    目的 探讨川芎嗪(ligustrazine)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心脏成纤维细胞纤维化的机制及影响。方法 体外培养SD大鼠乳鼠CFs，实验分为5组，A组(对照组)：培养时不加干预药物；B组(AngⅡ组)：加AngⅡ10-6mol/L；C组(川芎嗪低剂量组)：AngⅡ10-6mol/L+川芎嗪5 mg/L；D组(川芎嗪中剂量组)AngⅡ10-6mol/L+川芎嗪 10 mg/L；E组(川芎嗪高剂量组)AngⅡ10-6mol/L+川芎嗪 20 mg/L，干预48 h后，采用RT-PCR法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及钙调神经磷酸酶催化亚基Aβ亚型(CnAβ)mRNA的表达情况；Western Blot法检测α-SMA及活化T细胞核因子3(NFAT3)的蛋白表达情况。结果 与A组比较，B组α-SMAmRNA、CnAβmRNA表达均显著增高，差异有统计学意义(P0.05)，α-SMA、NFAT3蛋白表达无统计学意义(P>0.05)，D组和E组α-SMA、CnAβ的mRNA表达均显著降低，差异有统计学意义(P1 材料和方法

    1.1 材料及实验动物 实验用SD大鼠乳鼠购买于徐州医学院动物中心。试剂和药物：盐酸川芎嗪(哈尔滨三联药业有限公司)；高糖DMEM培养基含双抗(南京凯基生物有限公司)；胰酶细胞消化液(碧云天生物科技研究所)；胎牛血清(杭州四季青公司)；兔抗大鼠波形蛋白单克隆抗体(武汉博奥森公司)；血管紧张素Ⅱ(美国sigma公司)；总RNA提取试剂(Trizol)(美国Invitrogen公司)；反转录试剂盒(北京天根生物科技有限公司)；Rabbit Anti-NFAT3(北京博奥森公司)，Rabbit Anti-alpha smooth muscle Actin(北京博奥森公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 CFs培养与鉴定

    1.2.1.1 CFs的分离、培养 取1 d～3 d鼠龄的SD大鼠乳鼠，在无菌条件下开胸剪取心脏，剪去大血管，去心包膜，磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗数次，剪碎。0.125%胰蛋白酶在37 ℃水浴下反复消化(每5 min收集一次细胞悬液)，1 200 r/min离心5 min，将所得细胞置于含10%胎牛血清的细胞培养液(DMEM)培养基中，在37 ℃、5%CO2培养箱内培养90 min。采用差速贴壁法去除心肌细胞，每48 h后更换一次培养基 ......