史立信，胡福广，徐兆冰，吴景春，张文超，王传海

    辛伐他汀对大鼠颅脑外伤后弥漫性轴索损伤的实验研究

    史立信1，胡福广2，徐兆冰3，吴景春1，张文超1，王传海1

    目的 观察辛伐他汀对大鼠颅脑外伤后弥漫性轴索损伤的治疗效果。方法 用加速-减速装置制作大鼠弥漫性轴索损伤(DAI)模型，分为安慰剂组与辛伐他汀组，口服生理盐水与辛伐他汀14 d，另选健康SD大鼠作为对照组。以经修改神经功能损伤程度评分(mNSS)来测定神经功能恢复状态；以淀粉样-β阳性前体蛋白(APP)单克隆抗体进行免疫组化实验以测定轴索损伤程度，以Bielshowshy银染法测定神经轴索密度。结果 与安慰剂组及对照组比较，辛伐他汀组mNSS评分明显降低，差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 DAI模型建立 选取健康成年SD大鼠40只，雌雄各半，体重250 g～360 g，用4%水合氯醛麻醉(0.2 mL/100 g～0.4 mL/100 g)后，以西安交通大学医学院刘晓斌医师瞬间加-减速损伤装置制作DAI模型[5]：将已麻醉大鼠固定于旋转装置上，麻醉苏醒后在其尚处于激烈挣扎间歇期按动实验装置扳机，使其头颅瞬间旋转90°，并记录大鼠生命体征及行为改变，把DAI模型大鼠随机分为实验组和安慰剂组(生理盐水组)，各20只，另选20只SD大鼠作为健康对照组并正常饲养。安慰剂组SD大鼠给予生理盐水口服持续14 d；实验组SD大鼠给予辛伐他汀1 mg/(kg·d)，连续14 d。3组大鼠于实验第15 d分别以4%水合氯醛麻醉，依次经心脏灌注生理盐水及4%多聚甲醛至四肢抽搐、肺及肝脏变白，而后迅速解剖分离全脑，以4%多聚甲醛固定48 h，然后以冠状位等厚度分为7块取材，再脱水、透明、浸蜡及包埋处理。

    1.2 免疫组织化学及银染色检查 本实验以淀粉样-β阳性前体蛋白(amyloid β precursor protein，APP)单克隆抗体标记发生损伤的神经轴索[6]，并用Bielshowshy银染色以显示神经轴索。对于处理过的脑组织以生物组织切片机以5 μm厚度连续切片，脱蜡，水化，然后3%H2O2处理以阻断内源性过氧化物酶活性，将切片置于盛有1%柠檬酸溶液的高压锅中煮沸10 min以修复抗原，之后向组织切片上滴加1∶500的抗-APP一抗4 ℃孵育过夜，再滴加偶联有生物素的二抗室温下反应2 h，最后以DAB在光镜下显色。为了显示神经轴索形态，对脑组织切片进行Bielshowshy银染色：先把组织切片置于20%硝酸银中孵育，之后在氨水中返蓝。 ......