郭 慧，刘学军，杜毓锋，郝小燕，张 帆，郭娜娜，林白阳

    Notch1对肺纤维化小鼠肠黏膜屏障的影响及作用机制研究

    郭 慧，刘学军，杜毓锋，郝小燕，张 帆，郭娜娜，林白阳

    目的 探讨Notch1在肺纤维化肠黏膜屏障中的影响及其作用机制。方法 将24只健康雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(N组)、肺纤维化模型组(I组)、肺纤维化+Notch1抑制组(I+D组)。I组、I+D组气管内注入博来霉素造模，I+D组在造模后1周开始腹腔注射Notch1抑制剂DAPT。在造模后28 d全部处死小鼠，取小鼠血液、肺脏、回肠末端10 cm。血液离心后的血清用于ELISA测量丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的含量。右肺、5 cm回肠石蜡包埋后采用HE、Masson染色，并测量肠黏膜、肠绒毛以及肠隐窝的高度。PCR测量左肺、5 cm回肠末端的Notch1mRNA含量。结果 小鼠肺部HE染色、Masson染色、Ashcroft评分提示I组存在明显的纤维化改变，与N组、I+D组比较差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 实验动物以及分组 24只雄性C57BL/6小鼠，SPF级，体重20 g～25 g。将小鼠按照随机数字表获得的编号按大小分为3组，每组8只。

    1.2 要试剂及仪器 博来霉素(15 mg，日本株式会社)；DAPT(美国selleckchem公司)；Masson染色试剂盒(北京索莱宝)；丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)试剂盒(南京建成)；引物合成(上海生工)；反转录试剂盒(TAKARA，大连宝生物)；扩增试剂盒(Vazyme，诺唯赞)。实验中所用的Scanscope数字病理扫描系统、基因扩增仪、荧光定量PCR仪由山西医科大学科研中心提供。

    1.3 方法

    1.3.1 造模及取材 I组及I+D组按5 mg/kg气管内注入博来霉素。造模1周后，每天将DAPT腹腔注入I+D组，共7 d。造模后28 d后，所有小鼠均处死取材。心脏取血，收集入紫管。离心后，将血清标记，储存于-80 ℃冰箱。取小鼠左肺、右肺、回盲部上端10 cm肠道组织。左肺、5 cm回肠标记后储存于-80 ℃冰箱，右肺、5 cm回肠于10%甲醛液中固定，石蜡包埋。

    1.3.2 HE、Masson染色 肺脏、肠道的石蜡组织包埋后切片，按标准步骤进行HE染色。Masson染色测定肺部纤维化的程度 ......