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    缺血后处理(ischemic postconditioning，IPOC)是在缺血预处理基础上提出的新概念，具有重要的内源性脑保护作用，可减轻脑缺血再灌注(ischmia/ reperfusion，I/R)损伤。有研究发现，磷脂酸肌醇-3激酶(phosphoinositide-3-kinase，PI3K)/Akt信号途径参与IPOC的细胞保护，发挥抑制凋亡或促进增殖等效应[1]。药物后处理是近年研究的另一个热点，有研究证实其具有与IPOC类似作用[2]，但两者是否具有协同作用尚待进一步研究。临床研究及动物实验均证实，水蛭注射液治疗急性脑梗死有确切疗效[3]，但其后处理效应及机制尚不明确。本实验通过观察PI3K的表达变化，比较IPOC和联合水蛭注射液后处理对脑缺血再灌注损伤的影响，以探讨二者的协同脑保护机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物和药物制备 健康雄性SD大鼠40只(SPF级)，鼠龄2.0个月～2.2个月，体重250 g±50 g，购于广西医科大学实验动物中心。水蛭注射液由广西中医药大学第一附属医院中药制剂室制备，选用广西菲牛蛭的干燥全体经水煎醇沉法提取，再经跨热处理法制得，每支含1 g原生药(每支：2 mL)。

    1.2 动物分组及处理 将40只大鼠随机分为4组：假手术组(SO组)、缺血再灌注(MCAO)组、缺血后处理组(IPOC组)、缺血后处理+水蛭注射液后处理组(P-L组)。SO组：线栓只插入颈内动脉9 mm；MCAO组：实施90 min的脑缺血和24 h的再灌注；IPOC组与P-L组：在MCAO组基础上，在再灌注即刻将线栓从颈总动脉(CCA)内抽出30 s后，再将线栓置入30 s，反复进行3次后进行再灌注24 h。并在再灌注同时给予P-L组水蛭注射液4 mg/kg腹腔注射，其余各组予4 mL生理盐水腹腔注射。

    1.3 造模方式 采用线栓法建立大鼠MCAO模型，之后参照文献[4]行缺血后处理，即再灌注即刻将尼龙线栓从CCA内抽出30 s，再将线栓重新置入30 s，反复3次后进行再灌注24 h。

    1.4 主要试剂 总RNA提取试剂盒购于中国TIANGEN公司；PCR反应试剂盒及逆转录试剂盒购于日本TaKaRa公司；引物及内参均由大连宝生物有限公司提供；兔抗大鼠PI3K多克隆抗体购于美国Santa Cruz；偶联有辣根过氧化物(HRP)羊抗兔IgG二抗购于武汉博士德生物有限公司；内参甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)购于上海康成生物公司 ......