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    胶质瘤起源于神经胶质细胞，约占颅内中枢神经系统原发恶性肿瘤的50%～60%，是最常见的颅内原发肿瘤[1]。神经胶质瘤传统的治疗手段主要包括手术、放疗、化疗。然而，胶质瘤的浸润性生长、对放化疗的耐受性使得胶质瘤的整体治疗效果欠佳[2]。磷酸核糖焦磷酸合成酶2(PRPS2)基因是编码体内嘌呤、嘧啶两种核苷酸从头合成、补救合成的关键酶基因。通过下调PRPS2基因表达，进而抑制胶质瘤细胞的增殖，有望成为胶质瘤基因治疗的新思路[3]。人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因启动子具有高肿瘤靶向性及较强的启动活性，从而成为肿瘤靶向基因治疗中具有巨大潜力的启动子[4]。本研究拟通过hTERT启动子介导，利用RNAi技术下调神经胶质瘤U251细胞中PRPS2基因表达，研究其增殖、凋亡等生物学特性的变化。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 人胶质瘤U251细胞由本室保存；pGGN-hTERT-PRPS2干扰载体购自上海吉玛基因化学技术有限公司；胎牛血清购自四季青公司；DMEM购自GIBCO公司；质粒小提试剂盒购自Promega公司；Effectene Transfection Reagent购自QIAGEN公司；Cell Counting Kit8细胞增殖(CCK-8)试剂盒、Annexin V/PI细胞凋亡检测试剂盒购自凯基生物公司；Hoechst 33342购自碧云天生物技术研究所。

    1.2 RT-PCR检测 采用RT-PCR方法检测干扰载体对U251细胞中PRPS2的mRNA水平的影响。取RNA 2 μg，5×PrimeScript Buffer 4 μL，加RNase Free dH2O至总体积20 μL，37 ℃反应15 min，85 ℃反应5 s，反转录得cDNA。PCR 扩增人PRPS2基因，上游引物为：5′- GATTGCGTCATCATCCAG AGT-3′；下游引物为：5′- CATTCGCCTTCTTCCTCTCT T-3′ ......