刘 真,杨志玲,刘晓艳

    随着社会经济的发展,如高血压及高血压性心脏病、急性心肌梗死、心肌炎等各种心血管疾病的发病率逐渐升高,成为影响人们身体健康和生活质量的“杀手”,其从发生、发展到一定阶段的共同病理改变是心肌纤维化,心肌纤维化又是心室重构的主要表现之一,心室重构和心肌纤维化主要是由于心肌成纤维细胞过度增殖及分泌胶原纤维功能增强所致,心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)从体积上仅占整个心脏体积的25%,但从其数目上却占正常心肌组织细胞总数的60%～70%,由此可见,成纤维细胞对于心脏稳态的维持有着重要作用[1]。因此,研究心肌成纤维细胞对于现代心血管疾病的研究也具有重要意义。本研究探讨新生SD 大鼠心肌成纤维细胞的原代培养方法。现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 实验动物 出生后48 h 以内的健康SD 大鼠10 只,雌雄相混,SPF 级,由河北医科大学实验动物中心提供。

    1.1.2 主要实验试剂 D-Hanks 液(Solarbio),胰蛋白酶(含EDTA,Gibco),胎牛血清(FCS,四季青浙江天杭生物技术有限公司),DME/F-12(HyClone),P/S 双抗青链霉素(Gibco),兔抗波形蛋白单克隆抗体(abcam),羊抗兔IgG(Solarbio),DAB 浓缩型试剂盒(Solarbio),5%BSA 封闭液(Solarbio)。

    1.1.3 实验仪器 CO2恒温培养箱(力康生物医疗科技控股有限公司),超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司),低速离心机(金城国胜实验仪器厂),倒置生物显微镜(LEICA DMI3000 B),光学显微镜(LEICA),冰箱(青岛海尔股份有限公司),干燥箱、雪花制冰机及高压蒸汽灭菌锅均为松下电器 ......