黄小川，涂 强，帅青云，付 杰，谢华强，张 琰， 曹 政

    糖尿病是重要的心血管病危险因素，糖尿病引起的血管病变已经成为严重危害我国人民健康的重大慢性疾病。研究证实，血管内皮损伤修复及血管新生能力障碍是糖尿病缺血性血管病变的关键环节和始动机制[1]。骨髓和外周血中存在内皮细胞的前体细胞内皮祖细胞(endothelial progenitor cells，EPCs)是修复血管损伤的重要细胞生物学基础，在参与血管损伤修复和血管新生中起着重要作用[2]。胰高血糖素样肽-1是经肠道L细胞分泌的多肽类物质，其通过与胰高血糖素样肽-1受体(glucagon-like peptide-1 receptor，GLP-1R)结合促进胰岛素分泌从而发挥降糖作用[3]。近年来，GLP-1R激动剂在2型糖尿病治疗方面已获肯定，与传统降糖药物相比，除可以稳定降糖外，还具有减重、调脂、降压、护肾和降低心血管不良事件风险等益处[4-5]。然而，GLP-1R能否调控EPCs功能活性，促进损伤血管内皮的修复，目前尚不明确。本实验拟研究下调GLP-1R 表达对小鼠EPCs功能活性的影响，并初步探讨其可能机制，以期为EPCs介导的细胞疗法提供新的理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 动物与试剂 8周龄雄性C57BL/6J小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司(许可证号：SCXK-京-2016-0006)；小鼠淋巴细胞分离液(C-10831)及人纤维连接蛋白(F0895)购自美国Sigma公司；EGM-2培养基(C-22121)购自美国PromoCell公司；人重组血管内皮生长因子(100-20)购自美国PeproTech公司；携带靶向GLP-1R的shRNA并表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)的重组腺病毒及携带无义序列shRNA并表达GFP的重组腺病毒均购自山东维真生物科技有限公司；逆转录PCR试剂盒(KR123)购自TIANGEN公司；RIPA裂解液(P0013C)、BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0012S)及β-actin抗体(AF5001)均为碧云天公司生产；GLP-1R抗体(sc-390773)购自美国Santa Cruz公司；抗AKT抗体(YT0185)、抗磷酸化AKT 抗体(YP0006)、抗eNOS 抗体(YM3164)、抗磷酸化eNOS 抗体(YP1238)购自美国Immunoway公司；其他试剂均为进口分装或国产分析纯 ......