李 敏，王红艳，邵明阳

    脑血管疾病是全球范围内的常见疾病，缺血性脑损伤是诱导组织神经功能异常的重要原因。随着现代生物学技术的不断进步，有研究发现，缺血能够诱导大脑神经细胞损伤，以神经细胞凋亡、细胞活性降低等为主要特点[1]。缺氧缺糖神经细胞损伤模型是常见的体外研究模拟缺血损伤的经典模型，在神经科学的研究中广泛应用[2]。缺血神经损伤的发生机制复杂，目前还不能完全阐明，已知其发生与基因的表达改变有关。microRNA(miRNA)是一个在人体内具有多种生物学作用的调控因子，参与细胞生长、代谢、胚胎发育、细胞衰老等过程。很多研究表明，miRNA与疾病的进展有关，miRNA可能是疾病诊断以及治疗的生物标志物[3]。脑缺血神经损伤的发生与多个miRNA的表达改变有关，这些miRNA可能成为缺血性脑损伤治疗的分子靶标[4]。miR-138具有多种功能，与人类肿瘤、糖尿病肾病等有关，其在不同的病理过程中的作用机制不同[5-6]。在大鼠脑缺血损伤中发现miR-138表达下调，上调miR-138可以减轻脑组织损伤[7]。在大鼠神经干细胞损伤中发现，miR-138可以降低缺氧诱导的细胞损伤[8]。目前对miR-138在缺氧缺糖诱导的大鼠皮层神经细胞中的作用还不明确。本研究体外构建缺氧缺糖神经细胞损伤模型，探讨miR-138的作用和机制，以期为分子靶向治疗缺血性脑损伤提供可能。

    1 材料与方法

    1.1 材料 受孕16 d的Sprague-Dawley(SD)大鼠购自山东省实验动物中心。mimics control、miR-138 mimics购自上海吉玛制药技术有限公司；miRNA 第一链cDNA合成试剂盒、miRNA荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)试剂盒均购自生工生物工程(上海)股份有限公司；乳酸脱氢酶(LDH)含量测定试剂盒购自碧云天生物技术有限公司；Bax抗体、Bcl-2抗体均购自上海康朗生物科技有限公司；磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)抗体购自美国Santa Cruz Biotechnology；磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)抗体购自上海鑫乐生物科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 大鼠皮层神经细胞分离培养 细胞分离培养方法参照文献[9]，取受孕16 d的SD大鼠，乙醚麻醉以后，用75%的乙醇消毒，将胎鼠取出并放在预冷后的磷酸缓冲盐溶液(PBS)中洗涤，将血管、脑膜组织去除，取出大脑皮层组织，用PBS洗涤2次，用眼科剪将组织剪碎成1 mm3的碎块，添加0.25%的胰蛋白酶消化10 min ......