王大强，王革新，薛士鹏，张庆远，杜碧丽

    近年来，我国冠心病等心血管疾病发病率呈升高趋势，目前药物治疗多数是通过扩张血管、抗凝、改善心肌重塑等改善心肌缺血，通过介入治疗、溶栓等促进血液流通，延长心肌细胞生存时间，恢复心肌功能，但由于心肌细胞防御功能未发挥或自身存在抵抗作用，较多病人治疗后疗效不佳[1]。有研究显示，通过基因手段可改善心肌细胞适应能力，减少由缺血引起的细胞凋亡，抑制心肌损伤，可能为预防和治疗心肌缺血研究的方向[2]。

    Pitx2基因全名为paried-like homodmain transcription factor 2，其定位于4q25-26染色体上，Pitx2属于Bicoid家族成员，是一个转录因子，Pitx2和Pitx1、Pitx3共同构成了Pitx亚家族[3]。有研究表明，Pitx2在胚胎发育的眼睛周围、脐带、上下颌区域及四肢基部等部位表达，成人舌、脑、肺、肾等器官中也有Pitx2表达，Pitx2与左右不对称发育有关[4]。Pitx2突变引起多种疾病，如青光眼、角膜环状皮样瘤、乳腺癌等[5-7]。相关研究显示，Pitx2与心脏发育有关，敲除Pitx2可诱发小鼠心脏出现脂肪样组织，而获得Pitx2小鼠可免受缺血性心肌细胞损伤[8]。Pitx2缺陷的小鼠心尖部切除后不能及时修复，而增强Pitx2之后的小鼠心肌梗死后心肌组织再生能力明显增强，Pitx2具有保护心脏、促进心脏修复的作用[9]。目前关于Pitx2在缺氧诱导心肌细胞凋亡中的作用尚不明确。本研究以心肌细胞H9c2作为研究对象，探讨Pitx2对缺氧诱导的心肌细胞凋亡的影响及作用机制，以期为基因治疗和改善心肌缺血提供可能思路。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 C-Caspase-3抗体、Pitx2抗体购自美国Abcam公司；Pitx2过表达载体、C/EBP同源蛋白(CHOP)过表达载体、阴性对照载体均由普健生物(武汉)科技有限公司提供；CHOP抗体、C-Caspase-12抗体购自美国Proteintech公司；心肌细胞H9c2购自通派(上海)生物科技有限公司；CytoFLEX流式细胞仪购自美国贝克曼库尔特；MR-96A酶标仪购自深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司。

    1.2 细胞分组 心肌细胞培养条件为37 ℃，饱和湿度，5%CO2培养箱，细胞培养在添加10%胎牛血清的DMEM/F12培养液中，细胞传代培养以0.25%的胰蛋白酶消化进行传代培养。将心肌细胞分为4组，对照组：常规条件培养，为空白对照细胞；模型组：在实验开始时 ......