田 齐,贾海莉,庞永鹏,赵 刚,陈玺龙

    缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)是目前国内导致中老年人群死亡的重要因素之一,针对高危人群进行早期预防性干预能有效降低IS的发生率,避免严重后果的发生[1-2]。而目前针对IS高危人群的相关预测研究较多,但由于既往构建的模型指标质量差异,导致预测质量参差不齐[3]。伴随着基因研究的深入,对于IS疾病基因层面的研究使其临床检测指标的特异性明显提升。Li等[4]的研究显示,CD137(rs161827)、RNLS(rs10887800)、ALOX5AP(rs4073259)等基因位点中的不同表达与IS病人各类指标显著相关,故本研究在其基础上针对性建立IS预测模型,旨在为临床诊断及治疗提供参考依据。

    1 资料与方法

    1.1 临床资料 选取2018年7月—2019年12月于我院就诊并明确存在颈动脉粥样硬化且改良的弗明汉卒中量表评分≥15分的病人350例作为研究对象。

    1.2 纳入与排除标准 纳入标准:①经影像学检查明确存在颈动脉粥样硬化;②年龄>18岁,具有独立意识,能完成随访;③改良的弗明汉卒中量表评分≥15分;④病人及家属知情同意。排除标准:①既往IS病史;②合并其他严重的慢性疾病,预计生存期无法完成随访;③合并其他脑血管疾病;④长期使用免疫抑制剂、细胞毒类药物且无法暂停治疗;⑤半年内严重感染疾病病史。符合上述要求并上报医院伦理委员会审核通过后纳入研究。

    1.3 方法

    1.3.1 仪器及试剂 DNA提取试剂(DNAzolTMBD,赛默飞世尔公司生产);逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)Kit mRNA定量检测试剂盒(SYBR PrimeScriptTM,日本TaKaRa公司提供);定量聚合酶链式反应(PCR)仪及ABI377全自动DNA测序仪(Applied Biosystems ABI7500型,美国Biolytic公司提供);探针和引物的设计由北京三搏远志生物完成。

    1.3.2 各基因位点表达测定 所有病人于纳入研究后次日清晨抽取空腹静脉血,并提取样本内DNA后进行PCR扩增。扩增完成后取4 μL产物与缓冲液、浓度为2 μmol/L的混合探针各1 μL及Taq酶2 U混合成总量为10 μL的反应体系进行连接反应(反应体系总量不足用双蒸水补足),而后使用测序仪对产物进行单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点CD137(rs161827)、RNLS(rs10887800)、ALOX5AP(rs4073259)基因型及等位基因的分型检测,使用SDS2软件进行分析 ......