袁晓丽,江 莉,黄莉莉,胡 斌

    心血管疾病是一类发病率高、病亡率高、并发症多的严重疾病,由氧自由基过度合成引起的氧化应激,与心肌缺血再灌注损伤、心肌病、动脉粥样硬化等多种心血管疾病的发生发展有关[1-2]。花青素-3-葡萄糖苷也称为矢车菊素-3-葡萄糖苷,是花青素的主要活性成分,具有抗氧化、清除自由基、抗炎、抗肿瘤等多种生物学功能[3-4]。据报道,花青素可通过抑制活性氧-c-Jun氨基末端激酶-B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)通路,减轻心肌缺血损伤[5]。但花青素-3-葡萄糖苷在过氧化氢(H2O2)诱导的心肌损伤中是否有保护作用还不清楚。鉴于此,本研究探讨花青素-3-葡萄糖苷干预H2O2诱导的H9c2心肌细胞氧化损伤的作用机制,为该化合物的开发利用提供参考依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    H9c2心肌细胞(中国科学院上海细胞库),花青素-3-葡萄糖苷(纯度>98%,武汉前衍化学科技有限公司),益气活血颗粒(弘美制药有限公司,国药准字Z20030092),噻唑蓝(MTT)粉末、RIPA裂解液、增强型化学发光试剂(ECL)盒、二氢乙锭(DHE)活性氧(ROS)荧光探针购自上海碧云天生物科技有限公司,Hoechst 33342荧光染料(美国MCE),V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)细胞凋亡检测试剂盒(美国BD),β-actin鼠单克隆抗体、解偶联蛋白2(UCP2)、Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及切割后半胱天冬酶3(Cleaved Caspase-3)兔多克隆抗体购自美国Cell Signaling,Trizol试剂(美国Ambion Life Technology),逆转录试剂盒、实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)试剂盒购自美国Invitrogen。

    1.2 方法

    1.2.1 造模条件及给药浓度的筛选

    取H9c2细胞接种于96孔板,于37 ℃的5%CO2增湿培养箱中培养过夜,分别加入0、100、200、300、400、500、600、700 μmol/L的H2O2处理4、8、12 h建立心肌细胞损伤模型,并设置对照组(加入不含H2O2的培养基),加入MTT溶液100 μL,继续培养4 h,弃上清后加入150 μL二甲基亚砜溶液,37 ℃震荡10 min,490 nm处检测吸光度值,计算细胞存活率(试验孔吸光度值/对照组吸光度值×100%) ......