谭小青,张旭升,樊小容,黄战军

    血管钙化常见于动脉粥样硬化、血脂异常、高血压、糖尿病、慢性肾病及衰老等人群[1],血管钙化引起血管硬度增加、顺应性降低,导致心肌缺血、心力衰竭、血栓形成等,增加脑卒中、心脏病、动脉粥样硬化斑块破裂等的风险,被认为是影响心血管疾病的重要因素之一[2-4]。目前关于血管内膜、中膜和心脏瓣膜钙化的关注和研究相对较多。临床工作中发现,血管外膜也可发生钙化,然而调查发现,现阶段对血管外膜钙化的关注较少,因此,需要更多的研究来阐明血管钙化的致病机制。最初血管钙化被认为是被动和退行性病变,标志着血管老化,但是越来越多研究表明血管钙化是类似于胚胎骨形成的病理生物学过程[5-6]。Bostr?m等[7-8]研究发现,钙化过程中大鼠血管中膜细胞由原有收缩表型转变成为成骨样细胞表型,原有的收缩标志物如平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)等表达减少,并表达核心结合因子α1(Runx2)、骨形态生成蛋白2(BMP2)等多种成骨样标志物,从而介导骨基质在血管中沉积。细胞凋亡与自噬为2种细胞死亡的方式,与血管钙化息息相关,研究表明,血管中膜细胞在细胞凋亡过程中释放凋亡小体,促进细胞钙化,而细胞自噬通过多种机制调控细胞钙化[9-10]。本研究对大鼠血管外膜细胞进行体外诱导钙化,建立大鼠血管外膜细胞钙化模型,并检测钙化过程中成骨相关指标及凋亡、自噬相关蛋白的表达变化,旨在为心血管疾病模型提供更精确的细胞模型,并初步探讨其钙化机制。

    1 材料与方法

    1.1 试剂

    胎牛血清(FBS,Gibco),青霉素,链霉素(Gibco,美国),茜素红S溶液,β-甘油磷酸,抗坏血酸,地塞米松(Sigma,美国),抗GAPDH抗体(Bioworld),抗Bcl-2,Bax, Bcelin1和微血管相关蛋白(LC3)抗体(CST), 碱性磷酸酶检测试剂盒、钙(Ca)检测试剂盒(南京建城生物工程研究所) ......