王 艳,高 原,朱明军,唐进法,李 彬,王 贺,曹英杰,崔 琳,王小晓,沈 思

    心肌缺血再灌注(I/R)损伤是指在急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)发生后,药物或机械的早期再灌注在挽救缺血心肌的同时,会进一步导致心肌细胞功能障碍和组织损伤[1]。其中,心律失常是心肌I/R损伤的重要临床表现,以室性心律失常最为常见,严重者可发生恶性室性心动过速(ventricular tachycardia,VT)和心室纤颤(ventricular fibrillation,VF),是造成病人猝死的重要原因。细胞内钙超载和心肌能量代谢障碍是诱发心律失常的重要原因,而Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶在维持细胞钙稳态及能量的产生和利用方面起重要作用[2-4]。心肌I/R发生时Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性降低,导致心脏电活动的不稳定性和传导异常,增加心律失常发生率[5-6]。心肌细胞间信号传递的结构基础是缝隙连接(gap junction,GJ),在心脏电传导活动中发挥着重要的作用[7-8]。缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)则是心肌细胞间缝隙连接的主要连接蛋白,在心肌I/R状态下其表达含量和自身磷酸化状态的改变造成心肌细胞间电脱偶联,导致电冲动传导异常和心律失常的发生和持续[9-10]。桂枝甘草汤(Guizhi Gancao Decoction,GGD)温阳益气,是治疗心悸的基础方,出自汉代张仲景《伤寒论》,原文记载:“发汗过多,其人叉手自冒心,心下悸,欲得按者,桂枝甘草汤主之”。临床研究表明,GGD对不同类型心律失常具有较好疗效[11-12]。现有研究提示,GGD能够通过减轻钙超载、清除氧自由基、抑制炎症反应和细胞凋亡等机制对I/R心肌具有保护作用[13-14]。本研究通过构建大鼠心肌I/R损伤模型,从分子生物学层面研究GGD通过改善Cx43表达对心肌I/R致心律失常的影响及相关机制,为其减轻心律失常的临床治疗提供实验证据。

    1 材料与方法

    1.1 动物

    Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠90只,体质量250～300 g,购自河南省实验动物中心,动物许可证号为SCXK(豫)2017-0001。

    1.2 药品及试剂

    GGD浸膏(按照原著药量比例:即桂枝、甘草按2∶1的比例制备;1 g浸膏相当于9 g生药)由河南中医药大学第一附属医院提供。琥珀酸美托洛尔缓释片(Met)购自阿斯利康制药有限公司;血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI)检测试剂盒(批号:M3U4S6G5BR、78C8ABFAJY)购自Elabscience Biotechnology Co.,Ltd;Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶试剂盒(批号:TF4X7MBJWY、24NWU56XV9)购自Elabscience Biotechnology Co.,Ltd;大鼠Cx43免疫组化试剂盒(批号:15386-1-AP)购自武汉三鹰生物技术有限公司;Kir2.1多克隆抗体(批号:B7301)、磷酸化Cx43(p-Cx43)多克隆抗体(批号:B7101)购自ImmunoWay Biotechnology Company;辣根过氧化物酶(HRP)标记山羊抗鼠二抗(批号:B0101)、HRP标记山羊抗兔二抗(批号:20000258)购自武汉三鹰生物技术有限公司;甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体(批号:43929)购自GeneTex ......