单铁强,栗志英,张素华,蔡安盛,姚晓华,杜相珠,行红燕,郭永泽,马景红

    心脏在多种有害因素的长期或持续作用下,心肌细胞受损,而位于心肌细胞之间的成纤维细胞被过度活化,细胞增殖分裂能力及分泌活性均增强,加上在其他生物学因子的共同作用下,胶原等基质成分的分泌量大于降解量,造成其大量沉积且质地变硬,导致心肌发生纤维化病变[1-2]。此种病变使心肌细胞血氧缺乏,收缩能力下降,心肌传导系统功能异常,病人容易出现心律失常、心功能衰竭甚至猝死等严重病情而危及生命[3-4]。因此,探寻有效抑制成纤维细胞过度活化的措施为治疗心肌纤维化的重点。双氢青蒿素(DHA)源自于青蒿素,除作为优选的抗疟药物外,还具有抗病原微生物、降低炎症反应、抑制肿瘤及抗纤维化等药效[5-6]。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用于机体多种组织内的间质细胞,诱导其异常增殖、分裂及分泌过多的胶原等基质成分,促进组织发生纤维化病变[7-8]。本研究以新生鼠心室肌的成纤维细胞为研究对象,在体外采用AngⅡ诱导并制备纤维化细胞模型,经DHA干预后分析细胞增殖、转分化及激活NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体的作用,为拮抗心肌纤维化的新药研发提供新策略。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物

    新出生2 d的SD大鼠,由河北医科大学组胚教研室赠送。

    1.1.2 药物与试剂

    DHA购自陕西信康生物公司;AngⅡ、酶联免疫分析胶原蛋白含量的试剂盒由合肥莱尔生物有限公司提供;α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)第一抗体均由Abcam提供。

    1.2 方法

    1.2.1 消化组织、分离细胞

    取5只新出生2 d的SD大鼠,充分麻醉,将其整只喷乙醇进行消毒后,置于超净实验台上,剖开胸部露出心脏,剪下适当体积的心室肌组织块,洗净组织表面的血液和黏液,浸入盛有D-Hank′s的培养皿中,剪为细小颗粒后加入胰酶进行温浴消化40 min,滤网除去残渣,采用4 ℃、直径12 cm的离心机,以600 r/min速率离心10 min,离心后的细胞加入适量孵育液置于细胞培养箱中,根据成纤维细胞与其他细胞贴壁时间差异,将其纯化 ......