王金凤，王芳，王国玉，杨翠燕，赵庆兰(中国人民解放军联勤保障部队第九六四医院，长春 130062)

    胰岛素抵抗(IR)是2 型糖尿病、高脂血症、高血压病、冠心病和脂肪肝等一系列代谢相关疾病发生、发展的原动力，是其共同的病理生理基础[1]。肝脏是胰岛素(INS)的主要效应器官，是摄取、储存、合成和代谢葡萄糖的主要场所，在维持血糖稳定中起着最直接和最重要的作用[2]。因此，肝细胞糖代谢紊乱对IR 的发生发展具有重要意义。

    HepG2 细胞源于人的肝胚胎瘤细胞，具有类似肝细胞代谢功能，是体外研究IR 发病机制和降糖药物筛选及作用机制最常用的细胞模型[3]。人体IR 最主要的诱发因素是过量的糖和脂肪及继发性高胰岛素血症[4-5]，体外细胞学实验亦证明棕榈酸(PA)、INS、高糖可诱导HepG2 细胞建立IR模型[6-7]。然而，研究发现INS 诱导模型稳定性差，PA 对细胞损伤性大，单纯高糖的作用小，并非理想的IR 细胞模型[8]。本文采用高糖培养基，正交实验优选PA、INS 联合应用建立HepG2 细胞IR 模型的最佳条件，为IR 防治药物筛选及其发病机制研究提供良好的细胞模型。

    1 材料

    1.1 细胞系

    人肝癌 HepG2 细胞(中科院上海细胞库)。

    1.2 试药

    胰岛素注射液(400 U/10 mL，万邦生化医药集团)；噻唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)(美国Sigma 公司)；高糖培养基(DMEM，批号：1993859，Gibco 公司)；优级胎牛血清(FBS，货号：TBD21HY，灏洋生物制品科技有限公司)；葡萄糖测定试剂盒(货号：A031，长春汇力生物技术有限公司)；糖原检测试剂盒(货号：A043，南京建成生物研究所)。

    1.3 仪器

    UV-3200S 紫外分光光度仪(上海美谱达仪器有限公司)；MK3 酶标仪(Thermo Labsystems 公司)；HF90 CO2培养箱(上海力申科学仪器有限公司)；CK40 倒置显微镜(OLYMPUS 公司)。

    2 方法

    2.1 HepG2 细胞培养

    HepG2 细胞复苏后，用含15% FBS 的DMEM高糖培养基，于37℃、5% CO2饱和湿度条件下培养。待细胞贴壁长满后，弃去培养液，用PBS 清洗3 次。加适量0.25%胰蛋白酶消化，按1︰3 的比例传代。取对数生长期细胞用于实验。

    2.2 INS、PA 对细胞增殖的影响 ......