孙悦，包永睿，2，3，王帅，2，3，李天娇，2，3，孟宪生，2，3*(.辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 6600；2.辽宁省中药多维分析专业技术创新中心，辽宁 大连 6600；3.辽宁省现代中药研究工程实验室，辽宁 大连 6600)

    目前，微流控芯片技术在药物研发领域中发展迅速，凭借其高通量、低消耗等优势成为21 世纪分析科学及生命科学等众多领域的研究热点[1]。肝癌因其发病隐匿、致死率高，成为目前对人类健康和生命威胁极大的恶性肿瘤之一[2]。虽然手术治疗、放疗、化疗等都有一定效果，但肝癌患者5年的生存率仍不足20%，且复发率极高，因此寻找有效的抗肝癌药物迫在眉睫。作为传统满药第一方——复方木鸡颗粒是由云芝提取物、核桃楸皮、山豆根、菟丝子4味中药组成。云芝性甘、平，入心、脾、肝、肾经，具有健脾利湿、清热解毒的功效，常用于湿热黄疸、胁痛、纳差、倦怠乏力等[3]，现代研究[4]表明其具有较好的增强免疫、抗肿瘤等药理作用，为该方君药；辅以具有清热解毒作用的山豆根、核桃楸皮，以及具有补肝益肾作用的菟丝子共同发挥抗肝炎、肝硬化、肝癌等药理作用。根据文献调研[5-6]及前期课题组[7]研究发现，复方木鸡颗粒具有诱导肝癌细胞凋亡的作用，但其各组分药效作用尚不明确，故本实验将微流控芯片技术与中药复方相结合，针对中药复方药效筛选复杂又繁琐的问题，构建一种多功能的高通量药物筛选芯片，并考察芯片的适用性；同时利用该芯片开展复方木鸡颗粒及其各组分诱导肝癌HepG2 细胞凋亡作用研究。

    1 材料

    1.1 细胞株

    人肝癌HepG2 细胞购于齐氏(上海)生物科技有限公司。

    1.2 试药

    复方木鸡颗粒(规格：10 g/袋，批号：18080224)，核桃楸皮、菟丝子、山豆根、云芝药材由丹东药业提供，均经辽宁中医药大学药用植物教研室许亮教授鉴定，分别为胡桃科植物核桃楸Juglans mandshuricaMaxim.的干燥树皮、菟丝子亚科植物菟丝子Cuscuta chinensisLam.的干燥成熟种子、豆科植物越南槐Sophora tonkinensisGagnep.的干燥根和根茎、多孔菌科真菌彩绒革盖菌Coriolus versicolor(L.ex Fr.)Quel 的干燥子实体。

    紫杉醇注射液(山西普德药业股份有限公司)；负性环氧树脂光刻胶SU-8 及显影液(美国Micro-Chem 公司)；Sylgard 184 型聚二甲基硅氧烷PDMS 及固化剂(美国Dow-Corning 公司)；达尔伯克改良伊格尔氏培养基DMEM、0.25%胰蛋白酶-EDTA、胎牛血清(美国GIBCO 公司)；细胞凋亡/坏死检测试剂盒[含Hoechst 33342 染液和碘化丙啶(PI) ......