中药爵床抗血小板聚集的活性物质及作用机制研究
诱导剂,药组,溶剂,1材料,1试药,2仪器,3实验动物,2方法,1筛选爵床抗血小板聚集活性部位,2体外的爵床活性物质抗血小板聚集实验,3体内的爵床活性物质抗血小板聚集实验,4Westernblot实验,5统计学分析
陈鹏宇,姚云峰,张莹,柯辛格,余兵,吴和珍,3,杨艳芳,3,肖学成(1.湖北中医药大学药学院,武汉 430065;2.中药资源与中药化学湖北省重点实验室,武汉 430061;3.老年病中药新产品湖北省协同创新中心,武汉 430061)血栓形成是由于血管或心脏内流动的血液变为固态。血栓会导致血流阻塞,引发心肌梗死或者中风等血栓性疾病,对人们的健康产生严重危害[1];血小板是一种无核细胞,来自于骨髓巨核细胞,它的黏附、聚集、释放对于血管内血栓的形成具有重要作用。影响血小板的黏附、聚集等过程也是抗血栓药物研发的主流靶点[2-4]。阿司匹林、氯吡格雷等化学药物具有抗血小板聚集的作用,是目前临床上常用的血小板聚集抑制剂,其被广泛运用于治疗血栓性疾病[5]。但这些药物往往存在着作用机制单一、不良反应较大的缺点,难以被需要长期服药的患者所接受。故筛选安全有效的新的抗血小板聚集药物有着十分重要的意义。整合素β3主要在血小板中表达,是抗血小板治疗的首要靶点。根据课题组前期实验,初步确定爵床提取物抗血小板聚集的可能靶蛋白为整合素β3。
中药是新药研发的宝库,其安全性和有效性在几千年的药用历史中得到了检验。《神农本草经》最早收录了爵床,记载其味辛苦咸,性寒,入肝、肺、膀胱经,主治清热解毒、利尿消肿、截疟[6]。爵床中主要含有黄酮、生物碱、木脂素以及三萜类等成分,根据现代药理学研究,爵床具有镇痛、抑菌、抗炎以及抗肿瘤的作用[7-9]。课题组前期研究证实,爵床中的活性物质可以抑制血小板聚集,但具体的药效物质基础、作用机制还不完全清楚[10]。本文通过大孔吸附树脂法、制备性液相色谱法等分离纯化爵床中的活性成分,得到单体成分;构建动物模型来筛选活性物质,通过体外血小板实验和体内实验验证其药效,并初步探索抗血小板聚集的作用机制,为爵床进一步研究提供理论基础和实验数据。
1 材料
1.1 试药
爵床药材采于湖北宜昌,由湖北中医药大学药学院的吴和珍教授鉴定为爵床科植物爵床[Rostellularia procumbens(Lin.)Nees]的干燥全草。
D101 大孔吸附树脂(M0041)、角叉菜胶(C8830)(Solarbio 公 司);LDH 试剂盒(批 号:A019-2-2,南京建成生物医药有限公司);凝血酶(Thrombin,THR,规格:100 units,批号:T6884)、胶原(Collagen,COL,规格:25 mg,批号:C7661)及二磷酸腺苷(adenosine diphosphate ......
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