苦豆碱对活化的LX-2细胞增殖及凋亡的影响
细胞周期,批号,1材料,1仪器与试药,2方法,1细胞培养,2CCK-8法检测ALO对LX-2细胞增殖的影响,3ALO对L-02细胞的毒性,4ALO对LX-2细胞周期的影响,5ALO对于LX-2细胞凋亡的影响,6Col
范月莹,张洪,冯豆,宋玲,谭佳杰(武汉大学人民医院药学部,武汉 430060)肝纤维化是肝脏对由多种因素如炎症、病毒及免疫引发的肝损伤的一种反应[1-2],若肝脏持续受损,肝细胞则释放相关因子,从而激活肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs),产生大量细胞外基质(extracellular matrix,ECM),而ECM 的积累会导致肝纤维化[3]。虽然有相关临床药物应用,但还未能产生理想的疗效。研究人员正致力于寻找疗效佳、不良反应少的药物,希望能够延缓、抑制甚至逆转肝纤维化的进程。众多临床实践及实验发现,中药的药理作用具有多成分、多途径、多层次及多靶点等特征,能够缓解肝纤维化和肝硬化进程[4]。
苦豆子SophoraalopecuroidesL.是一种传统中草药,临床上用于治疗肠炎及急性细菌性痢疾[5-6]。苦豆碱(aloperine,ALO)属于喹诺里西啶类生物碱[7],来源于苦豆子。研究发现苦豆碱具有抗炎、抗病毒及抗肿瘤等药理作用,且作用明显[8-10],但苦豆碱对肝纤维化的作用尚未有相关报道。本研究主要探究苦豆碱对在肝纤维化发生发展过程中发挥重要作用的LX-2 细胞的影响。
1 材料
1.1 仪器与试药
HERAcell 160i 细胞CO2培养箱(美国 Thermo Fisher);SWCJ1F 细胞操作超净台(苏州安泰公司);TC20 细胞计数仪(美国 BIO-RID);EnSight酶标仪(美国 Perkin Elmer);FASC Calibur 流式细胞分析仪(美国 Becton Dickinson 公司);C1000普通PCR 仪、CFX 荧光定量PCR 仪(美国BIORAD);DYY-7C 电泳仪(北京六一);Odyssey 双色红外激光成像系统(美国 LI-COR)。
ALO(批号:19101122,北京科展生物科技有限公司,纯度>97.5%);DMEM 高糖培养基(批号:201020101)、胎牛血清(批号:19110505)、 含0.25% EDTA 胰蛋白酶(批 号:1912290101)(美国Gibco 公司);磷酸盐缓冲液(批号:20190725,武汉谷歌生物有限公司);转化生长因子-β(TGF-β1,批号:BGK01137,美国PeproTech 公司);CCK-8 检测试剂盒(批号:C0039,上海碧云天生物技术有限公司);碘化丙啶(PI,批号:20191205,武汉安特捷生物技术有限公司);RNase A(批号:9001-99-4 ......
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