葛根素纳米乳生产工艺分析
【中图分类号】TQ46 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783(2011)02-0170-01
【摘要】文章分析了注射用葛根素纳米乳的制备工艺，及质量评价方法。
【关键词】纳米乳;制备
纳米乳是近年来发展起来的一种新型给药系统，能够增加难溶性药物的溶解度、促进药物经胃肠道吸收或透皮吸收、延长药物释放时间、减轻注射疼痛和其他不良反应，是一种极具发展潜力的新型给药系统。
1 葛根素纳米乳的制备方法
1.1 葛根素在不同油相中的溶解度。将过量的葛根素原料药分别置于2 g的花生油、大豆油、液状石蜡中，涡旋混匀0.5 h，37℃振荡24 h，以达平衡，再以4 000 r•min-1离心，取上清液适量，测得葛根素的溶解度依次为(1.6±0.01)，(36±0.01)，(0.03±0.01)mg•g-1。由实验结果可知，葛根素在大豆油中的溶解度最大，故可以考虑选择大豆油作为制作葛根素纳米乳的油相。
1.2 表面活性剂的筛选。葛根素在大豆油中的溶解度最大，但仅靠油相溶解不能满足临床给药剂量，所以必须选择对葛根素增溶能力强的表面活性剂。
1.3 油相和助表面活性剂的筛选。将磷脂分别与助表面活性剂无水乙醇、1,2-丙二醇、PEG400、山梨醇按重量比Km=1∶1配成相同浓度的胶束溶液10 ml，磷脂与助表面活性剂浓度各为0.25 g•ml-1，均分3份，每份胶束溶液分别滴入油相花生油、大豆油、液状石蜡中形成体系，涡旋，以澄清度为指标，观察各体系的变化。结果表明，只有以大豆油为油相的体系能形成透明纳米乳。室温放置后，无水乙醇-水体系变浊，其余种体系仍澄清透明。
经过以上一系列试验的筛选，空白纳米乳的处方可以确定为：表面活性剂——磷脂，助表面活性剂——山梨醇，油相——大豆油。
1.4 空白纳米乳伪三元相图的绘制。以大豆油为油相，磷脂为表面活性剂，山梨醇为助表面活性剂，参照文献绘制伪三元相图，确定纳米乳区的范围，找出各组分的最佳比例。
将磷脂和山梨醇按质量比Km=1∶1，1∶2，2∶1混匀后，再按磷脂与油酸乙醋的质量比为1∶9，2∶8，3∶7，4∶6，5∶5的不同比例混合。先让其磁力搅拌均匀，再边搅拌边用水滴定，以澄清度为指标，判断是否形成纳米乳，记录形成纳米乳时临界点各组分的质量百分含量。在相图中找出相应的点，把能形成纳米乳的各点以曲线相连绘制成伪三元相图。
1.5 葛根素纳米乳类型鉴别。采用离心法、染色法鉴别纳米乳。离心法是以6 000 r•min-1离心30 min，观察是否分层，颜色、澄清度是否改变，若经过离心不分层，颜色、澄清度都无变化可判断为纳米乳。取葛根素纳米乳成品进行上述实验，证实制备的样品为纳米乳。
判断葛根素纳米乳的类型：利用油溶性染料苏丹红(红色)和水溶性染料亚甲兰(蓝色)在纳米乳中扩散的快慢来判断纳米乳的类型，若红色扩散快于蓝色则为W/O型纳米乳,反之则为O/W型纳米乳。结果表明，本实验所制得的葛根素纳米乳为O/W型纳米乳。
1.6 饱和葛根素纳米乳液的制备。将过量的葛根素加入到由磷脂、山梨醇、大豆油按处方比例组成的混合液中，涡旋混匀，加入处方量的水，磁力搅拌混匀，于37℃搅拌24 h，然后再以6 000 r•min-1离心40 min，取上清液，即得到葛根素纳米乳饱和液体。
将上述饱和液用超纯水稀释成适当浓度，于305 nm处测吸收度并计算浓度。按上述方法实际测得饱和葛根素纳米乳液的含量分别为(S1=25.50 mg•ml-1，S2=25.44 mg•ml-1，S3=25.50 mg•ml-1)取平均值为25.48 mg•ml-1，即葛根素在纳米乳中的溶解度为25.48 mg•ml-1。
据文献报道葛根素在水中的溶解度约为0.011 mol•L-1，显然低于本实验制得的纳米乳中葛根素的含量。
1.7 葛根素纳米乳质量评价
(1)外观性状。制得的葛根素纳米乳液为澄清、透明的浅黄色、流动性极好的液体。
(2)理化性质。电导率可以用来判断纳米乳的类型，电导率较大的为O/W型纳米乳，电导率较小的为W/O型纳米乳；粘度和折光率可以用来检查纳米乳的纯度；纳米乳的流变性对纳米乳的制备和使用具有重要意义，注射剂必须通针性好，对机体刺激性小，不引起疼痛，故要求体系粘度较低。研究表明，葛根素纳米乳中油量增加，则纳米乳的粘度增加，但均能自由流动，并具有良好的通针性。
取注射用葛根素纳米乳样品适量，用数字式粘度计测定粘度，用电导率仪测定电导率，用阿贝折光仪测定折光率。
形态和粒径分布采用透射电镜研究纳米乳形态。取适量葛根素纳米乳滴在铜网上，用磷钨酸溶液负染后晾干，于透射电镜下观察。葛根素纳米乳乳滴呈球形，大小均匀。
纳米乳粒径和粒径分布采用激光散射粒度测径仪测定。结果表明，葛根素纳米乳平均粒径为32.4nm，92.5%的乳滴粒径在15.45～43.56 nm之间，说明制备的注射用葛根素纳米乳粒径分布较窄，粒径较均匀。
(3)稳定性。离心稳定性：将制备的葛根素纳米乳以6 000 r•min-1离心40 min，观察有无分层、沉淀或浑浊等现象。结果表明葛根素纳米乳未出现分层、沉淀或浑浊等异常现象。
配伍稳定性：用葡萄糖注射液或氯化钠注射液将葛根素纳米乳稀释50倍，纳米乳外观仍澄清透明。长期稳定性：将本实验制得的葛根素纳注乳灌封于安瓿瓶中，分别置于4，25，37，60℃的条件下进行稳定性考察，于0，10，30，60，90，180 d分别取样进行性状观察、粒径测定和含量分析。结果表明，葛根素纳米乳在上述条件下，色泽、透明度、粒径和含量未有显著变化，说明葛根素纳米乳受温度影响较小，性质比较稳定。
3 讨论
通过筛选合适的注射用油、乳化剂和助乳化剂，并通过伪三元相图寻找最佳的纳米乳处方和工艺，成功地制备了葛根素注射用纳米乳，证实了纳米乳能够显著增加在水和油中均难溶的药物葛根素的溶解度，葛根素在纳米乳中的溶解度是其在水中溶解度的6倍。国外报道的油、水均难溶的喜树碱在纳米乳中的溶解度是水溶液的23倍。溶解度增大，有助于提高难溶性药物的生物利用度。
纳米乳制备过程中往往须加入较高浓度的表面活性剂，以降低液滴表面张力，得到粒径较小的乳滴。大量表面活性剂可能对机体产生不良反应。本研究选用的表面活性剂为注射用豆磷脂，其毒性、刺激性和溶血性均较小，适合作为注射用乳剂的乳化剂。通过处方和工艺优化，有效地降低了乳化剂的用量。, 百拇医药(张峰)
【摘要】文章分析了注射用葛根素纳米乳的制备工艺，及质量评价方法。
【关键词】纳米乳;制备
纳米乳是近年来发展起来的一种新型给药系统，能够增加难溶性药物的溶解度、促进药物经胃肠道吸收或透皮吸收、延长药物释放时间、减轻注射疼痛和其他不良反应，是一种极具发展潜力的新型给药系统。
1 葛根素纳米乳的制备方法
1.1 葛根素在不同油相中的溶解度。将过量的葛根素原料药分别置于2 g的花生油、大豆油、液状石蜡中，涡旋混匀0.5 h，37℃振荡24 h，以达平衡，再以4 000 r•min-1离心，取上清液适量，测得葛根素的溶解度依次为(1.6±0.01)，(36±0.01)，(0.03±0.01)mg•g-1。由实验结果可知，葛根素在大豆油中的溶解度最大，故可以考虑选择大豆油作为制作葛根素纳米乳的油相。
1.2 表面活性剂的筛选。葛根素在大豆油中的溶解度最大，但仅靠油相溶解不能满足临床给药剂量，所以必须选择对葛根素增溶能力强的表面活性剂。
1.3 油相和助表面活性剂的筛选。将磷脂分别与助表面活性剂无水乙醇、1,2-丙二醇、PEG400、山梨醇按重量比Km=1∶1配成相同浓度的胶束溶液10 ml，磷脂与助表面活性剂浓度各为0.25 g•ml-1，均分3份，每份胶束溶液分别滴入油相花生油、大豆油、液状石蜡中形成体系，涡旋，以澄清度为指标，观察各体系的变化。结果表明，只有以大豆油为油相的体系能形成透明纳米乳。室温放置后，无水乙醇-水体系变浊，其余种体系仍澄清透明。
经过以上一系列试验的筛选，空白纳米乳的处方可以确定为：表面活性剂——磷脂，助表面活性剂——山梨醇，油相——大豆油。
1.4 空白纳米乳伪三元相图的绘制。以大豆油为油相，磷脂为表面活性剂，山梨醇为助表面活性剂，参照文献绘制伪三元相图，确定纳米乳区的范围，找出各组分的最佳比例。
将磷脂和山梨醇按质量比Km=1∶1，1∶2，2∶1混匀后，再按磷脂与油酸乙醋的质量比为1∶9，2∶8，3∶7，4∶6，5∶5的不同比例混合。先让其磁力搅拌均匀，再边搅拌边用水滴定，以澄清度为指标，判断是否形成纳米乳，记录形成纳米乳时临界点各组分的质量百分含量。在相图中找出相应的点，把能形成纳米乳的各点以曲线相连绘制成伪三元相图。
1.5 葛根素纳米乳类型鉴别。采用离心法、染色法鉴别纳米乳。离心法是以6 000 r•min-1离心30 min，观察是否分层，颜色、澄清度是否改变，若经过离心不分层，颜色、澄清度都无变化可判断为纳米乳。取葛根素纳米乳成品进行上述实验，证实制备的样品为纳米乳。
判断葛根素纳米乳的类型：利用油溶性染料苏丹红(红色)和水溶性染料亚甲兰(蓝色)在纳米乳中扩散的快慢来判断纳米乳的类型，若红色扩散快于蓝色则为W/O型纳米乳,反之则为O/W型纳米乳。结果表明，本实验所制得的葛根素纳米乳为O/W型纳米乳。
1.6 饱和葛根素纳米乳液的制备。将过量的葛根素加入到由磷脂、山梨醇、大豆油按处方比例组成的混合液中，涡旋混匀，加入处方量的水，磁力搅拌混匀，于37℃搅拌24 h，然后再以6 000 r•min-1离心40 min，取上清液，即得到葛根素纳米乳饱和液体。
将上述饱和液用超纯水稀释成适当浓度，于305 nm处测吸收度并计算浓度。按上述方法实际测得饱和葛根素纳米乳液的含量分别为(S1=25.50 mg•ml-1，S2=25.44 mg•ml-1，S3=25.50 mg•ml-1)取平均值为25.48 mg•ml-1，即葛根素在纳米乳中的溶解度为25.48 mg•ml-1。
据文献报道葛根素在水中的溶解度约为0.011 mol•L-1，显然低于本实验制得的纳米乳中葛根素的含量。
1.7 葛根素纳米乳质量评价
(1)外观性状。制得的葛根素纳米乳液为澄清、透明的浅黄色、流动性极好的液体。
(2)理化性质。电导率可以用来判断纳米乳的类型，电导率较大的为O/W型纳米乳，电导率较小的为W/O型纳米乳；粘度和折光率可以用来检查纳米乳的纯度；纳米乳的流变性对纳米乳的制备和使用具有重要意义，注射剂必须通针性好，对机体刺激性小，不引起疼痛，故要求体系粘度较低。研究表明，葛根素纳米乳中油量增加，则纳米乳的粘度增加，但均能自由流动，并具有良好的通针性。
取注射用葛根素纳米乳样品适量，用数字式粘度计测定粘度，用电导率仪测定电导率，用阿贝折光仪测定折光率。
形态和粒径分布采用透射电镜研究纳米乳形态。取适量葛根素纳米乳滴在铜网上，用磷钨酸溶液负染后晾干，于透射电镜下观察。葛根素纳米乳乳滴呈球形，大小均匀。
纳米乳粒径和粒径分布采用激光散射粒度测径仪测定。结果表明，葛根素纳米乳平均粒径为32.4nm，92.5%的乳滴粒径在15.45～43.56 nm之间，说明制备的注射用葛根素纳米乳粒径分布较窄，粒径较均匀。
(3)稳定性。离心稳定性：将制备的葛根素纳米乳以6 000 r•min-1离心40 min，观察有无分层、沉淀或浑浊等现象。结果表明葛根素纳米乳未出现分层、沉淀或浑浊等异常现象。
配伍稳定性：用葡萄糖注射液或氯化钠注射液将葛根素纳米乳稀释50倍，纳米乳外观仍澄清透明。长期稳定性：将本实验制得的葛根素纳注乳灌封于安瓿瓶中，分别置于4，25，37，60℃的条件下进行稳定性考察，于0，10，30，60，90，180 d分别取样进行性状观察、粒径测定和含量分析。结果表明，葛根素纳米乳在上述条件下，色泽、透明度、粒径和含量未有显著变化，说明葛根素纳米乳受温度影响较小，性质比较稳定。
3 讨论
通过筛选合适的注射用油、乳化剂和助乳化剂，并通过伪三元相图寻找最佳的纳米乳处方和工艺，成功地制备了葛根素注射用纳米乳，证实了纳米乳能够显著增加在水和油中均难溶的药物葛根素的溶解度，葛根素在纳米乳中的溶解度是其在水中溶解度的6倍。国外报道的油、水均难溶的喜树碱在纳米乳中的溶解度是水溶液的23倍。溶解度增大，有助于提高难溶性药物的生物利用度。
纳米乳制备过程中往往须加入较高浓度的表面活性剂，以降低液滴表面张力，得到粒径较小的乳滴。大量表面活性剂可能对机体产生不良反应。本研究选用的表面活性剂为注射用豆磷脂，其毒性、刺激性和溶血性均较小，适合作为注射用乳剂的乳化剂。通过处方和工艺优化，有效地降低了乳化剂的用量。, 百拇医药(张峰)
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