关于多西环素的分析方法
【中图分类号】 R917 【文献标识码】A【文章编号】1672-3783(2011)04-0327-01
【摘要】文章简述了多西环素的分析方法。
【主题词】 多西环素分析方法
多西环素(Doxycycline)是四环素类抗生素。体内、外试验均表明它对革兰氏阳性、阴性菌有良好的抗菌作用；对支原体、衣原体和立克次体均高度敏感。临床上作为首选或选用药物应用于立克次体、支原体、衣原体及回归热螺旋体等非细菌性感染和布氏杆菌病，以及敏感菌所致的呼吸道、胆道、尿路及皮肤软组织等部位的感染。但多西环素也有很多的副作用，如：诱发低血糖、引起颅内高压、致光敏反应、致肝损伤。此外，多西环素的血浆蛋白结合率高，肾功能受损的患者服用时，可出现氮质血症，血清半衰期延长，血清浓度升高，故对其进行药物浓度测定是避免或减少不良反应的发生的有效方法。目前，已报道的测定多西环素的方法主要有高效液相色谱(HPLC)、毛细管电泳法(CE)、质谱法(MS)、微生物法、荧光法、导数光谱法、流动注射法、吸附溶出伏安法、离子对萃取法等。本研究就已有报道进行小结，为日后研究工作做铺垫。
一 药品中多西环素的分析方法
1 荧光分析法： 多西环素自身发射的荧光强度较弱，发射波长范围较宽，且呈平台峰，不宜直接采用荧光测定法，通常将其转化为具有较强荧光的化合物再进行检测。姚兵等报道将多西环素等四环素类抗菌素在浓硫酸作用下的降解物与β-环糊精的相互作用形成具有较强荧光的包络物建立了利用转化荧光结构法测定该类抗菌素的新方法，荧光检测限 0. 50×10-5mol/L，测定的相对标准偏差为 2.20%。
2 分光光度法： 紫外可见分光光度法由于操作简单、灵敏度高，广泛用于多种药物的制剂分析。由于多西环素能够与许多显色剂反应，产生的缔合物在可见光区具有良好的吸收，因此可用此法对药物进行测定。用氯化铜在碱性溶液中与含多西环素的溶液反应，在400nm 波长处测定反应产生的黄绿色光的吸收度来测定药物浓度大小，检测范围在 0～20mg/ml 之间。该法方法虽操作简单，但由于生物样品组分复杂，干扰因素多，检测灵敏度低，故不宜单独应用分析生物样品。
3 薄层分配色谱法(TLC)： 1991 年，Naidong 等用薄层色谱(TLC)法，紫外和荧光检测分析多西环素。流动相二氯甲烷-甲醇-水(58：35：7)，硅胶薄层先用 10%EDTA-Na 喷洒，pH9.0，结果 TLC-UV和 LC 相关系数大于 0.9999。TLC-UV 的相对标准差(RSD)小于2%。
4 旋光法测定： 旋光法测定抗生素含量方法简单，多西环素具有旋光性，旋光性与纯度或含量成线形。顾炳仁用旋光法测定了盐酸多西环素及其胶囊的含量，并与用微生物法测定药物效价进行比较，回收率为 100.07%，相对标准差为 0.25%。该方法测定时，只需一台旋光仪，测定方法简单，可以达到快速定量的目的，适宜于原料药及其制剂的测定。
5 高效液相色谱法(HPLC)： 高效液相色谱法(HPLC)是药品分析中常用的方法，具有特异性强、敏感性好、重现性好的优点。用 HPLC 法测定多西环素等四环素类药物，采用ODSC 18柱，草酸铵溶液-二甲基酰胺-磷酸氢二铵溶液(65：30：5)为流动相，紫外检测波长 280nm， 多西环素的最低检测限为 0.5ug/ml，线性范围 5～50ug/ml。HPLC 的主要缺点是分析时间相对较长，试剂消耗量较大。同时在某些情况下不能有效的保持分析柱的分析能力(柱效下降)。毛细管电泳法相对于液相色谱法，其分析时间较短，分析能力较强，但检测限(紫外吸收检测器)不及 HPLC，且重复性差。质谱技术亦有操作复杂、重复性较差的不足之处。实践证明，将色谱-质谱联用(HPLC-MS)，色谱-色谱(HPLC-HPLC)联用以及柱切换技术运用到生物样品的分析，不仅可以获取更多的定性信息，而且大大提高了定量分析的准确性。随着分析化学技术基础研究与临床试验应用的发展，使其检测手段更趋向精密、准确、简单、自动化的方向发展。
王军等在测定西环素口腔贴片中多西环素的含量时采用反相高效液相色谱法和碳18色谱柱，以0.05mol/L草酸铵溶液-二甲基甲酰铵-0.2mol/L磷酸氢二铵-甲醇(50：36：4：10)为流动相，检测波长为280nm，流速为0.9ml/min，柱温35℃。结果，盐酸多西环素保留时间10min左右，在2.5～250μg/ml的浓度内r=0.9999(n=8)，线性关系良好；日内以及日间的RSD分别为0.79%、0.73%，回收率为98.0%(RSD为1.04%)。该法可以快速准确地测定盐酸多西环素的含量及有关物质，回收率高，分离度好，比中国药典2005版该品种项下的色谱条件及系统适应性强。通过方法学验证，证明新系统非常适合多西环素口腔贴片的检测。
二 生物样品及血液中多西环素的分析方法
1 毛细管电泳法： 毛细管电泳是 80 年代掘起的一种新的高效分离技术。随着仪器的完善，在药学各个领域中应用越来越广。毛细管电泳分离效率高、样品量少，而且不像高效液相色谱柱样品中杂质污染。在对复杂样品分析，如体内药物分析，样品量受到一定限制时，有其一定的优点。高效毛细管电泳法是利用离子在电场力作用下迁移速度的不同对组份进行分离和分析。由于该法柱效高、分离速度快、样品量小、仪器简单，特别适用于生物样品中物质的测定。
2 放射免疫分析： 1981 年，Faraj 等用放射性免疫测定法动物体内血浆多西环素的药物浓度。此法高效精确、简便易行、灵敏度高，但存在放射性污染等缺点。
3 高效液相色谱法(HPLC)： 王旗等用HPLC法测定血清中多西环素。美国Spectra-Physics高效液相色谱系统，色谱柱为Inertsil ODS-3，流动相为乙睛-含0.15%二氟乙酸水 (50：50)，流速为1.0ml/min，柱温为室温，紫外检测波长为350nm。血清中加人内标土霉素，经C18固相萃取小柱提取后进样测定。结果多西环素的线性范围为0.125～5.0mg/L ，最低检出浓度为10μg/L，样本回收率为90.6%～104.3%，日内精密度<4.51 %，日间精密度<5.30%。此方法较为简便，结果准确可靠，适用于多西环素的药代动力学研究。
參考文献
[1 ]沈佳，韩泗. 盐酸多西环素致牙齿黄染3例.儿科药学杂志，2004，10(5)：60.
[2]方宝霞，陈富超，李开俊. 多西环素的不良反应与临床合理应用.中国误诊学杂志2006，6(20)：4084～4085.
[3]刘小玲. 常用药物致肝损害临床分析.医药论坛杂志，2003，24(16)： 15～17., 百拇医药(贾名林)
【摘要】文章简述了多西环素的分析方法。
【主题词】 多西环素分析方法
多西环素(Doxycycline)是四环素类抗生素。体内、外试验均表明它对革兰氏阳性、阴性菌有良好的抗菌作用；对支原体、衣原体和立克次体均高度敏感。临床上作为首选或选用药物应用于立克次体、支原体、衣原体及回归热螺旋体等非细菌性感染和布氏杆菌病，以及敏感菌所致的呼吸道、胆道、尿路及皮肤软组织等部位的感染。但多西环素也有很多的副作用，如：诱发低血糖、引起颅内高压、致光敏反应、致肝损伤。此外，多西环素的血浆蛋白结合率高，肾功能受损的患者服用时，可出现氮质血症，血清半衰期延长，血清浓度升高，故对其进行药物浓度测定是避免或减少不良反应的发生的有效方法。目前，已报道的测定多西环素的方法主要有高效液相色谱(HPLC)、毛细管电泳法(CE)、质谱法(MS)、微生物法、荧光法、导数光谱法、流动注射法、吸附溶出伏安法、离子对萃取法等。本研究就已有报道进行小结，为日后研究工作做铺垫。
一 药品中多西环素的分析方法
1 荧光分析法： 多西环素自身发射的荧光强度较弱，发射波长范围较宽，且呈平台峰，不宜直接采用荧光测定法，通常将其转化为具有较强荧光的化合物再进行检测。姚兵等报道将多西环素等四环素类抗菌素在浓硫酸作用下的降解物与β-环糊精的相互作用形成具有较强荧光的包络物建立了利用转化荧光结构法测定该类抗菌素的新方法，荧光检测限 0. 50×10-5mol/L，测定的相对标准偏差为 2.20%。
2 分光光度法： 紫外可见分光光度法由于操作简单、灵敏度高，广泛用于多种药物的制剂分析。由于多西环素能够与许多显色剂反应，产生的缔合物在可见光区具有良好的吸收，因此可用此法对药物进行测定。用氯化铜在碱性溶液中与含多西环素的溶液反应，在400nm 波长处测定反应产生的黄绿色光的吸收度来测定药物浓度大小，检测范围在 0～20mg/ml 之间。该法方法虽操作简单，但由于生物样品组分复杂，干扰因素多，检测灵敏度低，故不宜单独应用分析生物样品。
3 薄层分配色谱法(TLC)： 1991 年，Naidong 等用薄层色谱(TLC)法，紫外和荧光检测分析多西环素。流动相二氯甲烷-甲醇-水(58：35：7)，硅胶薄层先用 10%EDTA-Na 喷洒，pH9.0，结果 TLC-UV和 LC 相关系数大于 0.9999。TLC-UV 的相对标准差(RSD)小于2%。
4 旋光法测定： 旋光法测定抗生素含量方法简单，多西环素具有旋光性，旋光性与纯度或含量成线形。顾炳仁用旋光法测定了盐酸多西环素及其胶囊的含量，并与用微生物法测定药物效价进行比较，回收率为 100.07%，相对标准差为 0.25%。该方法测定时，只需一台旋光仪，测定方法简单，可以达到快速定量的目的，适宜于原料药及其制剂的测定。
5 高效液相色谱法(HPLC)： 高效液相色谱法(HPLC)是药品分析中常用的方法，具有特异性强、敏感性好、重现性好的优点。用 HPLC 法测定多西环素等四环素类药物，采用ODSC 18柱，草酸铵溶液-二甲基酰胺-磷酸氢二铵溶液(65：30：5)为流动相，紫外检测波长 280nm， 多西环素的最低检测限为 0.5ug/ml，线性范围 5～50ug/ml。HPLC 的主要缺点是分析时间相对较长，试剂消耗量较大。同时在某些情况下不能有效的保持分析柱的分析能力(柱效下降)。毛细管电泳法相对于液相色谱法，其分析时间较短，分析能力较强，但检测限(紫外吸收检测器)不及 HPLC，且重复性差。质谱技术亦有操作复杂、重复性较差的不足之处。实践证明，将色谱-质谱联用(HPLC-MS)，色谱-色谱(HPLC-HPLC)联用以及柱切换技术运用到生物样品的分析，不仅可以获取更多的定性信息，而且大大提高了定量分析的准确性。随着分析化学技术基础研究与临床试验应用的发展，使其检测手段更趋向精密、准确、简单、自动化的方向发展。
王军等在测定西环素口腔贴片中多西环素的含量时采用反相高效液相色谱法和碳18色谱柱，以0.05mol/L草酸铵溶液-二甲基甲酰铵-0.2mol/L磷酸氢二铵-甲醇(50：36：4：10)为流动相，检测波长为280nm，流速为0.9ml/min，柱温35℃。结果，盐酸多西环素保留时间10min左右，在2.5～250μg/ml的浓度内r=0.9999(n=8)，线性关系良好；日内以及日间的RSD分别为0.79%、0.73%，回收率为98.0%(RSD为1.04%)。该法可以快速准确地测定盐酸多西环素的含量及有关物质，回收率高，分离度好，比中国药典2005版该品种项下的色谱条件及系统适应性强。通过方法学验证，证明新系统非常适合多西环素口腔贴片的检测。
二 生物样品及血液中多西环素的分析方法
1 毛细管电泳法： 毛细管电泳是 80 年代掘起的一种新的高效分离技术。随着仪器的完善，在药学各个领域中应用越来越广。毛细管电泳分离效率高、样品量少，而且不像高效液相色谱柱样品中杂质污染。在对复杂样品分析，如体内药物分析，样品量受到一定限制时，有其一定的优点。高效毛细管电泳法是利用离子在电场力作用下迁移速度的不同对组份进行分离和分析。由于该法柱效高、分离速度快、样品量小、仪器简单，特别适用于生物样品中物质的测定。
2 放射免疫分析： 1981 年，Faraj 等用放射性免疫测定法动物体内血浆多西环素的药物浓度。此法高效精确、简便易行、灵敏度高，但存在放射性污染等缺点。
3 高效液相色谱法(HPLC)： 王旗等用HPLC法测定血清中多西环素。美国Spectra-Physics高效液相色谱系统，色谱柱为Inertsil ODS-3，流动相为乙睛-含0.15%二氟乙酸水 (50：50)，流速为1.0ml/min，柱温为室温，紫外检测波长为350nm。血清中加人内标土霉素，经C18固相萃取小柱提取后进样测定。结果多西环素的线性范围为0.125～5.0mg/L ，最低检出浓度为10μg/L，样本回收率为90.6%～104.3%，日内精密度<4.51 %，日间精密度<5.30%。此方法较为简便，结果准确可靠，适用于多西环素的药代动力学研究。
參考文献
[1 ]沈佳，韩泗. 盐酸多西环素致牙齿黄染3例.儿科药学杂志，2004，10(5)：60.
[2]方宝霞，陈富超，李开俊. 多西环素的不良反应与临床合理应用.中国误诊学杂志2006，6(20)：4084～4085.
[3]刘小玲. 常用药物致肝损害临床分析.医药论坛杂志，2003，24(16)： 15～17., 百拇医药(贾名林)