单克隆抗体用于血吸虫病诊断研究进展综述(1)
【中图分类号】R758.6【文献标识码】A【文章编号】1672-3783(2011)06-0025-01
【摘要】本文综述单克隆抗体用于血吸虫病诊断的研究进展。
【关键词】血吸虫病；免疫诊断；研究进展；综述
检测血吸虫病人血清中的循环抗原(CAg)不仅能反应血吸虫感染程度而且能及时评价抗血吸虫药物疗效，成为目前血吸虫诊断研究的一个热点。20世纪80年代至今，国内外寄生虫学者已把单克隆抗体技术引入到血吸虫病诊断,可以定性或定量检测宿主血清中的循环抗原[1]。
严自助等[2]研制了抗CCA-McAb-3D8A直接Dot-ELISA试剂盒，诊断急性、慢性及晚期病人阳性率分别为90.6%、83.2%和30.7%，初步试用于现场，效果良好。dot-ELISA检测CAg，操作简便，可用目测判断结果，可望成为基层诊断或进行流行病学调查的新阶段。
, 百拇医药
郑南才等[3]以制备的2E12单抗用Dot-ELISA检测血吸虫病人，急性、慢性和晚期病人血清中CAg检出率分别为93.0%、80.9%和33.3%。晚期病人检率低可能系虫体已经死亡所致。动物实验中，CAg检出时间早于粪检虫卵时间，2只粪检一直阴性的感染兔血清CAg检测阳性。说明该单克隆抗体及其所采用检测方法在临床和现场查病中将可有较大应用价值，拟于现场作进一步应用。
娄文娴等[4]将抗血吸虫CAg不同组分的单抗进行组合，以夹心ELISA用于CAg检测，其敏感性比一般用单一单抗提高4~8倍。
娄文娴等[5]将针对日本血吸虫不同抗原表位的McAb进行组合后检测相应的循环抗原，结果提示敏感性比单株McAb可提高4~8倍，针对GAA和SEA的McAb叠加，在低流行区的慢性病人中CAg的累计检出率明显提高。
娄文娴等[6]应用3株抗SEA-TCA和AWA-TCA单抗进行组合，定量检测日本血吸虫病人血清CAg，获较满意结果，其中2个单抗A9和H11在免疫电泳中与SEA-TCA均能形成沉淀弧,提示它们为抗重复表位的单抗，但其中任何单个单抗作为捕捉抗体和标记抗体，其检测结果均不及组合单抗效果好。因此应用单抗的合理配伍作为探针，既是必要的也是可行的。
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血吸虫的磷酸丙糖异构酶(TPI)存在于虫体发育的各个阶段，与血吸虫的糖酵解代谢有关，检测血吸虫的该酶抗原可提示是否有感染的存在。朱荫昌等[7]应用基因工程方法得到纯化的重组日本血吸虫(中国大陆株)TPI表达蛋白(rSjCTPI),并以此免疫小鼠，制备出高效价的抗rSjCTPI单克隆抗体，以酶标的抗rSjCTPI单抗为检测系统的ELISA法检测血吸虫病人血清CAg，显示有较好的敏感性和特异性，为血吸虫病诊断提供了又一有效工具。
裘丽妹等[8]用多抗和单抗夹心ELISA检测日本血吸虫病患者血清循环抗原，在受检的150例血吸虫病患者中，敏感性平均为84.7%；40例健康人未出现假阳性反应；74例其他寄生虫感染者中，有2例并殖吸虫病患者阳性，其余均未出现交叉反应，结果表明该法是一种较为理想的循环抗原检测方法。
Chen等[9]用构建噬菌体展示抗体文库的方法来制备单克隆抗体，以获得抗血吸虫的一种单链可变片段抗体(Sc一Fv)，所构建的文库用ELISA以日本血吸虫成虫代谢抗原来检测，结果显示了Sc一Fv在血吸虫病的辅助诊断中具有潜在价值，同时也为大批量制备抗日本血吸虫单克隆抗体提供了一种新的选择。
, 百拇医药
张恩英等[10]在已建立ELISA的基础上，应用3个针对日本血吸虫抗原不同表位的单克隆抗体标记胶体金，建立检测日本血吸虫病患者血清中血吸虫抗原的斑点金免疫渗滤法(dotimmunosoldfiltrationassay，DIGFA)。抗原和抗体在硝酸纤维素膜上进行反应，数分钟后即可用肉眼观察结果，同时以Dot-ELISA和夹心ELISA作对比，检测69例慢性血吸虫病患者血清中的循环抗原，阳性率为60.9%，特异性为95.2%。和ELISA相比，DIGFA除了省去底物反应步骤外，更主要的是便捷迅速，同时可单份检测个别病例，不需任何专门设备，故工作人员不需经过特殊培训就能操作，且检测效果、敏感性及特异性与ELISA相近。
Deelder等用单克隆抗体结合ELISA进行检测时，循环阳极抗原(CirculatingAnodicAntigen，CAA)可使灵敏度达到0.8 ng AWA-TCA/mL，对于EPG≥7的曼氏血吸虫病人的检出率可达90.9%[11]，而采用时分免疫荧光法其灵敏度可提高10倍以上[12]。
, 百拇医药
De Jonge等用生物素标记单克隆抗体(IgM亚类)的夹心ELISA法检测，循环阴极抗原(Circulating Cathodic Antigen，CCA)最低检出量为1.0 ng AWA-TCA/mL，提高了灵敏度[13]。此法可检出轻度感染曼氏血吸虫病患者。
Fu等[14]以抗虫卵抗原的多克隆抗体为捕捉抗体，以抗虫卵抗原的单克隆抗体为标记抗体进行夹心ELISA，检测日本血吸虫病患者血清中的循环Sj70抗原，结果95例慢性和12例急性血吸虫病患者中分别有93例和12例出现阳性反应，35例慢性患者经吡喹酮治疗6~12个月后，有33例Sj70抗原转为阴性，另2例Sj70抗原水平也有明显下降。
李剑瑛等[15]采用单克隆抗体反向间接红细胞凝集试验(McAb-RIHA)检测正常人血清，假阳性率为2.17%；对急性、慢性及晚期血吸虫病患者阳性率分别为99.39%、84.00%、28.57%。急性血吸虫病患者体内循环抗原含量高于慢性及晚期血吸虫病患者，反应滴度的几何均数分别为慢性及晚期血吸虫病患者的13.3和36.4倍，而不同感染度的慢性血吸虫病患者体内循环抗原的滴度与每克粪便虫卵数无明显关系。表明McAb-RIHA检测日本血吸虫循环抗原有较好的敏感性和特异性。
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尹东等[16]将单克隆抗体JPG3，以JPG3 Sandwich-ELISA检测62例血吸虫病患者不同年龄组感染者，经吡喹酮化疗后不同时期的CAg阴转率，差异均无统计学意义。表明JPG3单抗Sandwich-ELISA在评估血吸虫病经吡喹酮化疗后的疗效考核中有较好的应用价值。
吴玉龙等[17]以纯化的鸡抗SEA 卵黄抗体为捕捉杭体，以酶标抗SEA单克隆抗体 NP28-5B 进行双抗体夹心酶联免疫吸附试验法(S-ELISA)检测急慢性血吸虫病病人和健康人血清，并与常规检测杭体的酶联免疫吸附试验SEA-ELISA法做比较。S-ELISA法检测急性血吸虫病人循环抗原的阳性率为100%慢性血吸虫病人循环抗原的阳性率为84.4%；健康人的特异性为96%。两种方法对血吸虫病的检出率差异无统计学意义。S-ELISA法可用 于血吸虫病的免疫诊断。
曾小军等[18]用辣根过氧化物酶标记血吸虫单克隆抗体，建立夹心酶标法(S-ELISA)，并检测血吸虫病人及其它类型人群的血清。结果S-ELISA对急性血吸虫病人的检出率为88.64%；慢性血吸虫患者和正常人的检出率分别为75.00%和6.00%，与肝吸虫和乙型肝炎血清的交叉反应为0，肺吸虫的交叉反应为10.39%。说明本方法操作简便，有较好的敏感性与特异性，适宜于对血吸虫病的检测。
李雍龙等[19]用兔抗纯化31/32 kDa的多克隆抗体及抗31/32 kDa单克隆抗体建立的检测循环31/32 kDa抗原的双抗夹心-ELISA法,对日本血吸虫病、曼氏血吸虫病、埃及血吸虫病和间插血吸虫病的检出率分别为88% (n=69)、80% (n=56)、100% (n=40)、94% (n=65)，而检测正常的中国人和非洲人以及患旋毛虫病、肺吸虫病、囊尾蚴病的中国人均呈阴性，提示该法有诊断人类所有重要的血吸虫虫种感染的价值。, 百拇医药(杨林青)
【摘要】本文综述单克隆抗体用于血吸虫病诊断的研究进展。
【关键词】血吸虫病；免疫诊断；研究进展；综述
检测血吸虫病人血清中的循环抗原(CAg)不仅能反应血吸虫感染程度而且能及时评价抗血吸虫药物疗效，成为目前血吸虫诊断研究的一个热点。20世纪80年代至今，国内外寄生虫学者已把单克隆抗体技术引入到血吸虫病诊断,可以定性或定量检测宿主血清中的循环抗原[1]。
严自助等[2]研制了抗CCA-McAb-3D8A直接Dot-ELISA试剂盒，诊断急性、慢性及晚期病人阳性率分别为90.6%、83.2%和30.7%，初步试用于现场，效果良好。dot-ELISA检测CAg，操作简便，可用目测判断结果，可望成为基层诊断或进行流行病学调查的新阶段。
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郑南才等[3]以制备的2E12单抗用Dot-ELISA检测血吸虫病人，急性、慢性和晚期病人血清中CAg检出率分别为93.0%、80.9%和33.3%。晚期病人检率低可能系虫体已经死亡所致。动物实验中，CAg检出时间早于粪检虫卵时间，2只粪检一直阴性的感染兔血清CAg检测阳性。说明该单克隆抗体及其所采用检测方法在临床和现场查病中将可有较大应用价值，拟于现场作进一步应用。
娄文娴等[4]将抗血吸虫CAg不同组分的单抗进行组合，以夹心ELISA用于CAg检测，其敏感性比一般用单一单抗提高4~8倍。
娄文娴等[5]将针对日本血吸虫不同抗原表位的McAb进行组合后检测相应的循环抗原，结果提示敏感性比单株McAb可提高4~8倍，针对GAA和SEA的McAb叠加，在低流行区的慢性病人中CAg的累计检出率明显提高。
娄文娴等[6]应用3株抗SEA-TCA和AWA-TCA单抗进行组合，定量检测日本血吸虫病人血清CAg，获较满意结果，其中2个单抗A9和H11在免疫电泳中与SEA-TCA均能形成沉淀弧,提示它们为抗重复表位的单抗，但其中任何单个单抗作为捕捉抗体和标记抗体，其检测结果均不及组合单抗效果好。因此应用单抗的合理配伍作为探针，既是必要的也是可行的。
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血吸虫的磷酸丙糖异构酶(TPI)存在于虫体发育的各个阶段，与血吸虫的糖酵解代谢有关，检测血吸虫的该酶抗原可提示是否有感染的存在。朱荫昌等[7]应用基因工程方法得到纯化的重组日本血吸虫(中国大陆株)TPI表达蛋白(rSjCTPI),并以此免疫小鼠，制备出高效价的抗rSjCTPI单克隆抗体，以酶标的抗rSjCTPI单抗为检测系统的ELISA法检测血吸虫病人血清CAg，显示有较好的敏感性和特异性，为血吸虫病诊断提供了又一有效工具。
裘丽妹等[8]用多抗和单抗夹心ELISA检测日本血吸虫病患者血清循环抗原，在受检的150例血吸虫病患者中，敏感性平均为84.7%；40例健康人未出现假阳性反应；74例其他寄生虫感染者中，有2例并殖吸虫病患者阳性，其余均未出现交叉反应，结果表明该法是一种较为理想的循环抗原检测方法。
Chen等[9]用构建噬菌体展示抗体文库的方法来制备单克隆抗体，以获得抗血吸虫的一种单链可变片段抗体(Sc一Fv)，所构建的文库用ELISA以日本血吸虫成虫代谢抗原来检测，结果显示了Sc一Fv在血吸虫病的辅助诊断中具有潜在价值，同时也为大批量制备抗日本血吸虫单克隆抗体提供了一种新的选择。
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张恩英等[10]在已建立ELISA的基础上，应用3个针对日本血吸虫抗原不同表位的单克隆抗体标记胶体金，建立检测日本血吸虫病患者血清中血吸虫抗原的斑点金免疫渗滤法(dotimmunosoldfiltrationassay，DIGFA)。抗原和抗体在硝酸纤维素膜上进行反应，数分钟后即可用肉眼观察结果，同时以Dot-ELISA和夹心ELISA作对比，检测69例慢性血吸虫病患者血清中的循环抗原，阳性率为60.9%，特异性为95.2%。和ELISA相比，DIGFA除了省去底物反应步骤外，更主要的是便捷迅速，同时可单份检测个别病例，不需任何专门设备，故工作人员不需经过特殊培训就能操作，且检测效果、敏感性及特异性与ELISA相近。
Deelder等用单克隆抗体结合ELISA进行检测时，循环阳极抗原(CirculatingAnodicAntigen，CAA)可使灵敏度达到0.8 ng AWA-TCA/mL，对于EPG≥7的曼氏血吸虫病人的检出率可达90.9%[11]，而采用时分免疫荧光法其灵敏度可提高10倍以上[12]。
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De Jonge等用生物素标记单克隆抗体(IgM亚类)的夹心ELISA法检测，循环阴极抗原(Circulating Cathodic Antigen，CCA)最低检出量为1.0 ng AWA-TCA/mL，提高了灵敏度[13]。此法可检出轻度感染曼氏血吸虫病患者。
Fu等[14]以抗虫卵抗原的多克隆抗体为捕捉抗体，以抗虫卵抗原的单克隆抗体为标记抗体进行夹心ELISA，检测日本血吸虫病患者血清中的循环Sj70抗原，结果95例慢性和12例急性血吸虫病患者中分别有93例和12例出现阳性反应，35例慢性患者经吡喹酮治疗6~12个月后，有33例Sj70抗原转为阴性，另2例Sj70抗原水平也有明显下降。
李剑瑛等[15]采用单克隆抗体反向间接红细胞凝集试验(McAb-RIHA)检测正常人血清，假阳性率为2.17%；对急性、慢性及晚期血吸虫病患者阳性率分别为99.39%、84.00%、28.57%。急性血吸虫病患者体内循环抗原含量高于慢性及晚期血吸虫病患者，反应滴度的几何均数分别为慢性及晚期血吸虫病患者的13.3和36.4倍，而不同感染度的慢性血吸虫病患者体内循环抗原的滴度与每克粪便虫卵数无明显关系。表明McAb-RIHA检测日本血吸虫循环抗原有较好的敏感性和特异性。
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尹东等[16]将单克隆抗体JPG3，以JPG3 Sandwich-ELISA检测62例血吸虫病患者不同年龄组感染者，经吡喹酮化疗后不同时期的CAg阴转率，差异均无统计学意义。表明JPG3单抗Sandwich-ELISA在评估血吸虫病经吡喹酮化疗后的疗效考核中有较好的应用价值。
吴玉龙等[17]以纯化的鸡抗SEA 卵黄抗体为捕捉杭体，以酶标抗SEA单克隆抗体 NP28-5B 进行双抗体夹心酶联免疫吸附试验法(S-ELISA)检测急慢性血吸虫病病人和健康人血清，并与常规检测杭体的酶联免疫吸附试验SEA-ELISA法做比较。S-ELISA法检测急性血吸虫病人循环抗原的阳性率为100%慢性血吸虫病人循环抗原的阳性率为84.4%；健康人的特异性为96%。两种方法对血吸虫病的检出率差异无统计学意义。S-ELISA法可用 于血吸虫病的免疫诊断。
曾小军等[18]用辣根过氧化物酶标记血吸虫单克隆抗体，建立夹心酶标法(S-ELISA)，并检测血吸虫病人及其它类型人群的血清。结果S-ELISA对急性血吸虫病人的检出率为88.64%；慢性血吸虫患者和正常人的检出率分别为75.00%和6.00%，与肝吸虫和乙型肝炎血清的交叉反应为0，肺吸虫的交叉反应为10.39%。说明本方法操作简便，有较好的敏感性与特异性，适宜于对血吸虫病的检测。
李雍龙等[19]用兔抗纯化31/32 kDa的多克隆抗体及抗31/32 kDa单克隆抗体建立的检测循环31/32 kDa抗原的双抗夹心-ELISA法,对日本血吸虫病、曼氏血吸虫病、埃及血吸虫病和间插血吸虫病的检出率分别为88% (n=69)、80% (n=56)、100% (n=40)、94% (n=65)，而检测正常的中国人和非洲人以及患旋毛虫病、肺吸虫病、囊尾蚴病的中国人均呈阴性，提示该法有诊断人类所有重要的血吸虫虫种感染的价值。, 百拇医药(杨林青)
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