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用酶联免疫法检测艾滋病毒抗体及影响检测结果因素的分析
http://www.100md.com 2010年6月1日 《健康必读·中旬刊》 20106
     艾滋病(AIDS)全称为获得性免疫缺陷综合症,是由人类免疫缺陷病毒(H1V)引起的,被称为人类21世纪的“瘟疫”和超级癌症。

    HIV主要存在在于血液和精液中,潜伏期长达2~10年。HIV主要通过性传播,血液传播和母婴传播。

    由于艾滋病的痊愈和预防接种仍然无望,治疗仅是对症,因此HIV的实验室检测就成为预防AIDS的一个十分重要的措施。

    用酶联免疫法(ELISA)检测抗一HIV是目前国际上应用最广泛的筛选抗一HIV的方法,根据其检测原理不同,可分为两类,第一类:间接ELISA法,抗原+待检标本+抗人lg-酶结合物+底物。第二类:竞争ELISA法,抗原+待检标本,HIV抗体-酶结合物+底物(显色)。

    以上两类ELISA法中,以间接ELISA法的使用更广泛。本法具有快速、准确、自动化强度高等优点,有利于大规模筛检。

    在实验操作中,由于ELISA法较敏感,有很多因素都会影响到检测结果,现分析如下:

    1 试剂盒:要使用经过国家卫生部批准鉴定有防伪标志的EIA检测试剂盒,并在有效期内使用,过期试剂不能用。

    2 包被板:包被板的外底部尽量不要用手触摸,以免粘上汗渍、污渍,不要被坚硬的物划伤,更不能粘上异物,否则都会影响检测标本的OD值,使其升高,造成实验结果的假阳性。

    3 加样:加样一定要准确,加样时加样器的吸头不要触及包被孔的内底部,以免划掉包被物,从而影响实验结果的准确性。正确的操作方法是沿包被孔的内壁加样。

    4 封板:每次封板时所用的封条不能重复使用,以免影响结果的准确性。

    5 温浴时间:温浴时间不能过长也不能过短,过长会使OD值偏高甚至出现假阳性,过短会使OD值偏低或出现假阴性。

    6 洗板:洗涤时各孔均需加满洗液,防止因洗涤不充分造成非特异反映,造成假阳性或花板。

    7 显色:加入显色剂后,应在本试剂盒要求的时间范围内加入终止液,否则,实验结果不准确。另外,若室温较低时,会影响显色的时间及显色的速度,使结果出现假阴性。

    8 比色;用酶标仪比色时。包被孔内不能有气泡,否则,结果将会升高。

    以上几点是影响抗-HIV(EIA)检测结果的重要因素,在实际工作中只要注意这几个方面的问题,是可以避免操作失败的。, 百拇医药(陈桂芬)